Fundamental tibbiyot va biologiya instituti O‘simliklar fiziologiyasi va biokimyosi kafedrasi

UNIVERSITET

Fundamental tibbiyot va biologiya instituti

O‘simliklar fiziologiyasi va biokimyosi kafedrasi

O'SIMLARNING MIKROKO'P KO'SHILISHI

O'quv yordami

Qozon - 2012 yil
FGAOUVPO tahririyat-nashriyot kengashi qarori bilan nashr etilgan

"Qozon (Volga viloyati) federal universiteti"

Fundamental institutining o'quv-uslubiy komissiyasi

tibbiyot va biologiya

2012 yil 4 iyundagi 2-sonli bayonnoma

o'simliklar fiziologiyasi va biokimyosi kafedrasi yig'ilishlari

2012 yil 23 maydagi 2-sonli bayonnoma

Muallif:

samimiy. biol. Fanlar, san'at. o'qituvchi Yu.Yu. Nevmerjitskaya

Taqrizchilar

samimiy. biol. Fanlar, dots. E.V. Babynin

O'simliklarning klonal mikroko'payishi: O'quv-uslubiy

nafaqa / O.A. Timofeeva, Yu.Yu. Nevmerjitskaya. - Qozon: Kazanskiy

universitet, 2012. - 56 p.

O'quv qo'llanma umumlashtirilgan o'z ichiga oladi

"Agrofitobiotexnologiya" kursining bo'limlaridan biri bo'yicha material. IN

nafaqa ko'rib chiqilmoqda

biotexnologiya

klonal

vegetativ ko'payish koeffitsienti va dan reabilitatsiya qilish

virus urug'i. Qo'llanma talabalar uchun mo'ljallangan

fiziologiya va biotexnologiyani o'rganadigan bakalavrlar va magistrlar

o'simliklar.

© Qozon (Volga viloyati) Federal universiteti, 2012 yil

Timofeeva O.A., Nevmerjitskaya Yu.Yu.

Klonal mikroko'paytirish Yangisini joriy etishdagi asosiy to'siqlardan biri amalda navlar - ko'p sonni olishning mumkin emasligi vegetativ ko'paytirish uchun urug'lar yoki ko'chat materiallari. Bu to'siq biotexnologiya yordamida olib tashlanadi, qaysi taklif etadi Selektsionerlar samarali va tez mikroko'paytirish usuli o'simliklar. Eksperimental morfogenez jarayonini in vitroda o'rganish tashkilotning barcha darajalarida - bitta hujayradan o'qning tepasiga qadar klonal mikroko'paytirish texnologiyasining rivojlanishiga olib keldi ko'pgina mamlakatlarda allaqachon tijoratga aylangan zavodlar.

davomiyligi yoki tufayli sekin amalga oshiriladi qaysi

vegetativ ko'payishning etishmasligi (bu turlarning ko'pchiligi bilan

vegetativ ko'payish uchun juda qiyinchilik bilan va ichida

ba'zi holatlar, masalan, monokot palmalar va ba'zilari uchun

o'rmon daraxtlarining turlari, umumiy vegetativ ko'payish

imkonsiz);

 heterotik duragaylarni yoki boshqalarni saqlash

o'simliklarni kesib o'tishda heterozigotlarning bo'linishi;

 noyob va yoʻqolib ketish xavfi ostida turgan turlarni saqlash, masalan;

ginseng, uning hududi Uzoq Sharqda joylashgan (Xitoy,

Koreya, Rossiya), faqat Xitoyda Rossiya bilan chegarada va 3-yilda saqlanib qolgan

Rossiya hududlarida uni tur sifatida saqlash uchun etarli miqdorda.
Klonal mikroko'paytirishning asoschisi

Fransuz olimi Jorj Morel. 1960 yilda u bu usulni ishlab chiqdi

orkide uchun. J. Morel eksplant sifatida cho'qqidan foydalangan

cymbidium (oilaviy orkide), o'sish konusi va ikkitadan iborat

uchta bargli primordiya, ulardan ma'lum sharoitlarda

sharsimon shakllanishlar paydo bo'ldi - protokormlar (1-rasm).

Shakllangan protokollarni bo'lish mumkin va keyin

yangi tayyorlangan ozuqada mustaqil ravishda etishtirish

barg primordiyasi va ildizlari hosil bo'lgunga qadar o'rta. Natijada, ular

bu jarayonning cheksiz ekanligi va unda olish mumkinligi aniqlandi

ko'p miqdorda yuqori sifatli va genetik jihatdan bir hil,

virussiz ekish materiali.

60-yillarda toʻqimalar madaniyati va morfogenez laboratoriyasida boshlangan

professor R.G.ning rahbarligi. Butenko, shartlar o'rganildi

kartoshka, qand lavlagi, chinnigullar, gerberalarni mikroko'paytirish,

frezya va boshqa ba'zi o'simliklar, sanoat

mikroko'paytirish texnologiyalari.

A B
Rasm tushadi 1111

Schltr.; B - litofit Laelia iundii Rchb.f. va issiq.

Klonal mikroko'paytirish turli usullar bilan amalga oshirilishi mumkin.

yo'llari. Klonal mikroko'paytirishning asosiy turlari:

 apikal dominantlikni bostirish va aksillar rivojlanishi

buyraklar;

- mikro kesish;

 mikrotuberlar, mikrobulbalar hosil bo‘lishi:

- bevosita adventit buyraklarning induksiyasi

eksplant to'qimalar;

 keyingi induktsiya bilan kallus to'qimasini olish

organogenez yoki embrioidogenez.

Aksillar kurtaklari bilan ko'payish. Ko'pchilik yuqori

o'simliklar o'sishning oraliq turiga ega bo'lib, unda qo'ltiqlarda

barglarda qo'shimcha meristematik to'qimalar mavjud;

asosiy bilan bir xil qochishga aylana oladi.
2 rasm
Guruch. 2. Usul bo'yicha o'simliklarni klonal mikroko'paytirish sxemasi

mavjud meristemalarning rivojlanishini faollashtirish (I yo'l), induksiya

eksplantda tasodifiy kurtaklarning paydo bo'lishi (II yo'l): 1 - tanlov

original eksplant; 2 - steril madaniyatni olish; 3-

to'g'ridan-to'g'ri birlamchi buyraklar paydo bo'lishi

eksplantatsiya; 4 - kurtaklarning o'sishi va mikrokurtaklar shakllanishi; 5 -

mikrokurtaklarni ko'paytirish (kesish); 7 - omonat

past haroratlarda qayta tiklangan o'simliklar; 8 - tarjima

issiqxona sharoitida o'simliklar; 9 - regenerativ o'simliklar ekish

tuproq.
Ushbu turning dallanish xususiyatiga ko'ra

o'simliklar, cheklangan miqdordagi aksillar

meristematik to'qimalar. Ularning ko'pchiligining rivojlanishi sust

apikal kurtaklarning ustun rivojlanishi tufayli lateral kurtaklar). IN

Klonal mikroko'paytirishning bu usuli olib tashlashga asoslangan

apikal ustunlik va aksillar meristemalarning faollashishi. Bu

poyaning apikal meristemasini olib tashlash orqali erishish mumkin va

keyinchalik in vitroda o'simtani gormonsiz mikro kesish

muhit (3-rasm). Garchi apikal dominantlik ko'rinadi

bir nechta gormonal tizimlar tomonidan boshqariladi

o'simliklar, aksillar kurtaklar nish o'sishi, oxir-oqibat, bog'liq

meristematik to'qimalarni sitokininlar bilan ta'minlash. Olib tashlash

apikal hukmronlik muhitga kiritish orqali ham mumkin

olib keladi sitokinin faolligi (3-rasm) bilan moddalar

bilan nisbatan qisqartirilgan internod bilan kurtaklar nish shakllanishi

qo'ltiq osti kurtaklari va meristematik tuberkullar bunga sabab bo'ladi

yangi qochishlar.
3 rasm tushadi
3-rasm. Aksillar faollashtirish usuli bilan o'simliklarni ko'paytirish sxemasi

meristema: 1 - apikal meristemani olib tashlash orqali: 2 -

muhitga gormonlar qo'shish.

Oddiy muhitda o'stirilgan uchlarini o'qqa tuting

gormonlar, odatda apikal bilan yolg'iz kurtaklar rivojlanadi

hukmronlik. o'z ichiga olgan muhitda etishtirilganda

sitokininlar, asosiy kurtaklar ko'pincha rivojlanmagan holda o'sadi, keyin esa

ikkinchi tartibli kurtaklar, keyin uchinchi va hokazo tez shakllanadi

rivojlangan, u umumiy ildizga ega bo'lgan kichikroq to'plamlarga bo'linishi mumkin

qachon shakllanishi mumkin tizimi yoki alohida kurtaklar nish ustida

yangi muhitda o'stiriladi, bir xil kurtaklar. huzurida

yaxshi muvozanatli muhit, bu jarayon, aftidan, mumkin

cheksiz davom eting. Misol uchun, tez ko'payadigan asirlari

gladioluslar 11 yil davomida sezilmasdan saqlangan

fiziologik buzilish.

Kam rivojlangan aksiller sinuslarning shakllanishi mumkin bo'lgan tezlik

asirlari in vitro barg hosil bo'lish tezligiga bog'liq. Oxirgi

o'simlik turiga va ozuqaning mosligiga qarab o'zgaradi

muhit. Ma'lum darajada ko'payish tezligi bo'lishi mumkin

sitokinin kontsentratsiyasini va ishlatiladigan hajmini nazorat qilish

kema. Turli o'simliklarda tezlik yaxshi tomonga o'zgarib turadi

o'simliklarni o'stirish, u beshdan o'n barobargacha o'zgaradi

4 dan 8 haftagacha ko'tariladi. Misol uchun, naslchilik paytida

gerbera, kurtakning yuqori qismi ozuqaviy muhitga joylashtiriladi,

tarkibida 4,62 mkM/l sitokinin mavjud. Poyasi cho‘qqisining o‘sishi boshlanadi

Ekishdan 7-8 kun o'tgach. Vegetativ kurtakli

5-6 haftadan so'ng hosil bo'lgan asosiy barglar. Qochishning tagida

kallus rivojlanadi va ildizlar farqlanadi. Barglarning axillarida

buyraklar yotqizilgan. 1,38 - 4,62 mkM/l sitokininni muhitga kiritish

lateral kurtaklarning uyg'onishi va tez rivojlanishiga sabab bo'ladi, bu esa

ikkinchi va uchinchi darajali aksillar kurtaklar hosil qiladi. Da

qo'ltiq osti kurtaklaridan rivojlangan kurtaklarni izolyatsiya qilish va o'tkazish

kinetinning bir xil konsentratsiyasini o'z ichiga olgan muhit kuzatiladi

aksillar buyraklarni faollashtirish jarayonini takrorlash, 3-4 marta

hafta, 8-10 kurtaklar hosil bo'ladi.

malina, gilos, olxo'rining aksillar kurtaklari rivojlanishini rag'batlantiradi;

olma daraxtlari. Shu bilan birga, bir steril olingan surgun yuqoridan

yiliga bir necha ming o'simlik olishingiz mumkin. Masalan, qachon

malina meristemasini in vitroda yetishtirish mumkin

50 000 gacha o'simliklarning avlodlari, an'anaviy texnikada esa

payvandlash yiliga 50 ta o'simlik ishlab chiqarishni ta'minlaydi.

Aksillar kurtaklar nish olish uchun kesilganlar madaniyatga kiritiladi.

otishma uchlari yoki in vitro hosil bo'lgan tasodifiy kurtaklar. To'qimachilik,

ko'payish uchun zarur, apikaldan kesilishi mumkin.

tashqi barglar, to'qimalarning hajmini cheklash (1 - 5 mm).

Apikal eksplant qanchalik katta bo'lsa, u tezroq o'sadi va

omon qolish ehtimoli ko'proq. Apikal eksplant odatda

sitokinin va auksin kontsentratsiyasi past bo'lgan muhitga joylashtiriladi. Da

Har bir keyingi transplantatsiya, muhitdagi sitokinin darajasi asta-sekin

maksimal tezlikka erishilgunga qadar oshiring

naslchilik. Agar to'qimalarning tagida kamida bir nechtasi paydo bo'lsa

kallus hosil bo'lish tendentsiyasi, auksin muhitdan chiqariladi.

Sitokininlar deyarli har doim ildiz shakllanishiga to'sqinlik qiladi, shuning uchun

keyingi tsikl natijasida hosil bo'lgan kurtaklar to'dalari

yetishtirish, osonroq ajratiladi. Muhitga o'tkazilganda, emas

sitokininlarni o'z ichiga olgan ildiz shakllanishi o'z-o'zidan sodir bo'ladi;

ayniqsa monokotlarda.

O'simliklarni mikroko'paytirishning asosiy muammosi kontsentratsiyadir

atrof-muhitdagi fitohormonlar. Murashigening asosiy bo'lgan asarlarida

mikroko'paytirish, yuqori konsentratsiyalar haqida xabar berilgan

sitokininlar, shuningdek, kompozitsiya bo'yicha tayyor tavsiyalar

ozuqa muhiti va etishtirish sharoitlari. Biroq, juda tez-tez

olish uchun sitokininlarning yuqori konsentratsiyasidan foydalanish

maksimal ko'paytirish omili shunday sabab bo'ladi

o'zgartirish kabi mikroko'paytirish uchun kiruvchi ta'sirlar

o'simlik morfologiyasi, aksillar meristema proliferatsiyasini inhibe qilish,

asirlarning ildiz otish qobiliyatining pasayishi.

Minimal konsentratsiyali madaniy muhitdan foydalanish

etarli tezlikni ta'minlaydigan sitokininlar

mikroko'paytirish, shuningdek, kultivatsiya davrlarini almashish

fitohormonlar darajasi past bo'lgan muhitlardan qochishga yordam beradi

ularning doimiyligi tufayli sitokininlarning toksik ta'siri

ozuqa muhitida mavjudligi.

Mikrotuberlar va mikrotuberlar bilan ko'paytirish. Usul

to'qima madaniyati mikro miqyosli va

an'anaviy so'qmoqlarning takomillashtirilgan versiyasi.

Aseptik qo'shimchalar va tegishli ozuqaviy qo'shimchalar

agar kerak bo'lsa, eksplant hajmini kamaytirishga ruxsat bering

bir necha millimetr va ko'paytirish omilini oshiring.

Ko'p miqdordagi ekinlar mikrokesish orqali ko'paytiriladi.
Kartoshkani so'qmoqlar bilan klonal mikroko'paytirish

quyidagicha amalga oshiriladi. Kartoshka ildizlari unib chiqadi

10-15 kun. Bu vaqt ichida ular uzoq sarg'ish ko'rinadi

kichik rivojlanmagan barglari bilan kurtaklar nish. Bunday qochishlar deyiladi

etiolated, ular balog'atga etmagan xususiyatlarini saqlab qoladilar. borib taqaladi

bir buyrakni o'z ichiga olgan bo'laklarga bo'linib, sterillangan va

ozuqaviy muhitga joylashtiriladi. Tez orada poyaning segmentlari

probirkalarda so'qmoqlar bilan ko'payadigan o'simliklar hosil qiladi.

Buning uchun o'simliklar probirkadan chiqariladi va bo'laklarga bo'linadi

bitta barg va aksillar kurtak.

1 2 3

4 rasm tushadi

Guruch. 4. 1 - kartoshka mikroplanti; 2 - kartoshkani ko'paytirish

in vitro; 3 - virussiz kartoshkaning mikrotuberlari.

Segmentlar oziq moddasi bo'lgan probirkalarga o'tkaziladi. Ulardan

tuproqqa ko'chirilishi mumkin bo'lgan ko'chatlar hosil bo'ladi, ular qaerda

oddiy kartoshka o'simliklariga aylanadi. Ko'chirish orqali

probirkali o'simliklar boshqa tarkibdagi muhitda va boshqa sharoitlarda

yorug'lik mayda ildizlarning shakllanishiga olib kelishi mumkin (shuning uchun

"mikrotuberlar" deb ataladi).

Ushbu texnologiya ko'p sonli o'stirish imkonini beradi

cheklangan joyda o'simliklar: har bir laganda o'z ichiga olishi mumkin

kvadrat metrga 500 tagacha ko'chat. Olti oy ichida

bitta ko‘chat 100 000 tagacha klon hosil qilishi mumkin.

O'rim-yig'imdan keyin mikrotuberlar past darajada saqlanishi kerak

haroratlar. 45 kundan keyin va keyingi etti oy ichida
rag'batlantirish uchun ular issiqroq muhitga joylashtirilishi mumkin

unib chiqishi. Mikrotuberlar virussiz urug'larni etishtirish uchun ishlatiladi

foydalanish mumkin bo'lgan oddiy o'lchamdagi kartoshka

qishloq xo'jaligi. O'simliklar o'sishi bilan himoyaga muhtoj.

yangi yuqumli kasalliklarning oldini olish uchun hasharotlar zararkunandalari

kasalliklar.

5 rasm tushadi

Guruch. 5. Lampochkaning differentsiatsiyasi va Allium mikroko'payishi

carataviense Regel.

To'qnashuvli (qo'rqinchli) kurtaklar bilan ko'paytirish.

Qo'shimchalar paydo bo'lishining ko'plab faktlari mavjud (adventiv)

etuk o'simlik organlarida, ayniqsa barglarda, poyada va

ildizlar. Bunday hodisalar ko'pincha so'qmoqlar uchun amalda qo'llaniladi.

O'simlikning deyarli barcha organlari so'qmoqlar uchun ishlatilishi mumkin:

begonias va boshqa dorivor barglarda hosil bo'lgan asirlari

o'simliklar, turli piyozchalar tarozida, poya bo'laklarida va

daraxt ildizlari, masalan, olma daraxtlari. Keng tarqalgan

o'simlik dunyosi bu turdagi reproduktiv regeneratsiyaga olib keldi

20-asr boshlarida hujayralarning "totipotentligi" tushunchasining paydo bo'lishi va

o'simlik to'qimalari. Hujayra madaniyati usulidan muvaffaqiyatli foydalanish va

ko'p sonli o'simliklarda kurtaklar ishlab chiqarish uchun to'qimalar tasdiqlangan

bu tushuncha.

Organ ekplantlarida tasodifiy kurtaklar tiklanishi mumkin

ko‘p sonli o‘simliklardan olinadi. Biroq, ularning ko'pchiligi

tomonidan bir xil reproduktsiyani osongina olish mumkin

genetik jihatdan barqarorroq bo'lgan aksillar kurtaklar yordamida. TOAfsuski, tez etishtirish uchun yaroqsiz ko'plab o'simliklar mavjud

ular juda sekin bo'lgani uchun bu yo'l bilan ko'paytirishadi

tasodifiy kurtaklar hosil qiladi. Bu o'simliklarga ignabargli daraxtlar kiradi.

va ba'zi palma daraxtlari, shuningdek, turli xil bezak va

lampochka ko'payadigan bir pallali o'simliklar.

Ko'p hollarda, tasodifiy kurtaklar tomonidan ko'paytirish uchun

an'anaviy kabi bir xil organdan foydalanish qulayroqdir

naslchilik, lekin ancha yoshroq. Ko'p sonli mato

meristematik hujayralar faolroq yangilanadi. Yordamida

ko'plab bulbous o'simliklar bu usul bilan ko'paytirildi

(nargis, zambaklar, sümbüller, gladioli, lolalar) piyozchalardan

tarozilar, lampochka asosining bazal qismining segmentlari, barg eksplantlari;

Brassica jinsi vakillari (gulkaram, karam, Bryussel gullari,

barg, brokkoli) gipokotil segmentlaridan, kotiledonlardan, barglardan; piyoz,

sarimsoq - apikal meristemadan, lampochkalarning pastki qismidagi to'qimalardan; dan

apikal yoki aksiller meristemalar; hindibo salatasi - segmentlardan

barg pichoqlari; petuniya - ildizlarning segmentlaridan; gloxiniya,

binafshalar - barg pichoqlari segmentlaridan.

Adventitsiyaning kelib chiqishi shubhasiz qiziqish uyg'otadi

otadi. Afsuski, ko'pgina ishlarda klonal

mikropropagatsiya asosiy savol: qaysi to'qimalar qabul qiladi

qo'shimcha kurtaklar nish farqlash ishtirok, aniq holda qoladi

javob. Bu tasodifiy kurtaklar nish rivojlanishi, deb taxmin qilish mantiqiy

meristematik to'qimalar hisobiga amalga oshirilishi mumkin. Yaxshi

ma'lumki, o'simlikda apikal va aksillar bilan birga

ildiz va poya meristemalarida lateral, interkalyar mavjud

meristemalar, shuningdek o'sishi cheklangan organlar meristemalari. Da

meristematik to'qimalarning regeneratsiyasini qat'iy bajaradi

bilan o'simlik organizmidagi ma'lum funktsiyalar qayta tashkil etiladi

bu ularning asl funksiyalarini tiklaydi. Masalan, at

Go'shtli barglarning qirralari bo'ylab Kalanchoe meristematikdir

buyraklarga aylanadigan hujayralar.

Shu bilan birga, tasodifiy kurtaklar rivojlanishi mumkin emas

meristematik to'qimalar. Frantsuz tadqiqotchisi Tran Tan

Vang qiziqarli kultivatsiya tajribasini o'tkazdi

epidermis va ikki yoki uchta subepidermaldan tashkil topgan eksplantlar

qatlamlar. Uning so'zlariga ko'ra, buyraklar va ildizlarning tiklanishi sodir bo'ldi

to'g'ridan-to'g'ri epidermis hujayralaridan.

Guruch. 6. Saintpaulia eksplantidagi adventiv kurtaklar.

Keyinchalik, xuddi shu muallif individual etishtirishni amalga oshirdi

ildiz to'qimalarining hujayra qatlamlari, ya'ni epidermis,

subepidermal to'qimalar, epidermis bilan birga

to'qimalar, epidermissiz poya, izolyatsiya qilingan epidermis va keyin

subepidermal to'qimalar bilan bevosita yoki orqali birlashtiriladi

yupqa agar qatlami. Kurtaklar va ildizlarning farqlanishi ma'lum bo'ldi

epidermisda faqat bo'g'im holatida qo'zg'atilgan

bo'lganligidan qat'i nazar, uni asosiy to'qima bilan o'stirish

epidermis oldindan izolyatsiya qilinadi va keyin tekislanadi

subepidermal to'qimalar yoki yo'q. Faqat etishtirishda

subepidermal to'qimalar yoki epidermissiz poya hosil bo'ladi

ildizlar. Izolyatsiya qilingan epidermis organogenezga qodir emas edi. Yoniq

lola lampochkalari tubining bazal qismining segmentlari amalga oshirildi

Bu tasodifiy ekanligini ko'rsatadigan sitologik tadqiqotlar

meristematikning sirt qatlamlaridan kurtaklar hosil bo'lgan

donutga ulashgan hujayralar. Gloxinia o'simliklar jarayoni uchun

barg pichoqlarining hujayra qatlamlari.

Shunday qilib, bu mikroko'paytirish usuli asoslangan

ikkita tubdan farq qiladigan narsa:

1.

mavjud meristemalardan kurtaklarning paydo bo'lishi;

ixtisoslashgan hujayralarning qayta differentsiatsiyasi, shakllanishi

poya kurtaklarining meristematik o'choqlari va differentsiatsiyasi.

Ikkinchi holda, adventit buyraklar odatda paydo bo'ladi

epidermis yoki subepidermal to'qimalar. Bular orasidagi farq

jarayonlar katta ahamiyatga ega, chunki meristematik

o'simliklarning kelib chiqishi ularning genetik o'ziga xosligini kafolatlaydi

ota-ona shakllari.

Noqulay kurtaklar bilan ko'paytirishning eng samarali usuli

lampochka va kurtaklar hosil qiluvchi o'simliklar uchun. Ko'pchilik

bulbous tabiatda juda sekin ko'payadi. Ularni tezlashtirish uchun

kabi turli xil an'anaviy yondashuvlardan foydalanish

lampochkani kesish, masshtablash va bo'lish

bulbous buyrak. Hujayra va to'qima madaniyati usuli imkon beradi

bundaylardan o'simliklarning ko'payish tezligini sezilarli darajada oshirish

intensiv regeneratsiya kabi tarozilar yoki lampalar

kichikroq hajmdagi eksplantlar va uzun yordami bilan

tsiklik etishtirish. In vitro surgun shakllanishi mumkin bo'lsa-da

turli organlardan induktsiya qilinadi, eng katta qobiliyat

regeneratsiya barglar va tarozilar tagidagi to'qimalarga ega;

to'g'ridan-to'g'ri lampochkaning tagida joylashgan. In vitro

kurtaklar paydo bo'lishi tarozidan yoki eksplantlarda paydo bo'ladi

auxin yoki auksin va sitokininni o'z ichiga olgan muhitda barglar.

Turli bulbous o'simliklardan in vitro rivojlanayotgan kurtaklar,

bo'linishi va bir xil kurtaklar olish uchun ishlatilishi mumkin.

Ba'zi lampalarda, masalan, iris, orasidagi intervallarda

yosh barglar va tarozilar orasida ham aksillar, ham paydo bo'ladi

tasodifiy otishmalar. Boshqa o'simliklarda (narcissus, sümbül, levkoy)

apikal hukmronlik kuchli talaffuz, va shuning uchun, olish uchun

ko'p sonli tasodifiy kurtaklar nish, u yuqori bo'linish kerak

asosiy qochish. Bunga 2 vertikal bilan erishiladi

gorizontal tekislikka to'g'ri burchak ostida kesadi. Keyinchalik bu

xuddi shu protsedura har bir qo'shimcha kurtaklar to'plami bilan takrorlanadi,

kesilgan tarozilar orasida o'sadi.

sitokininlarni o'z ichiga olgan, dan qo'shimcha kurtaklar rivojlanadi

korm to'qimasi. Shu bilan birga, tasodifiy kurtaklar paydo bo'ladi

har bir probirkada 1 - 3 miqdori. Shu bilan birga yotqizilgan

ko'p buyraklar. Biroq, ikkinchisining normal o'sishi uchun

asosiy otishmani olib tashlash va segmentni ko'chirish kerak

yangi muhitda piyoz.

Gul kurtaklari tagida qo'shimcha kurtaklar nish hosil bo'lishi

shuningdek, freziyani klonal ko'paytirish usuli hisoblanadi. Gulli

frezya kurtaklari tezda gullaydi, keyin gul quriydi va dan

8-16 hafta ichida har bir eksplant birdan uchgacha hosil bo'ladi

kurtaklar, shuningdek, ko'p sonli poyasini farqlaydi

meristemalar. Inflorescences izolyatsiya qilingan segmentlarini etishtirish orqali, mumkin

gerberada tasodifiy kurtaklar paydo bo'lishiga olib keladi,

spathiphyllum va boshqa bir qator madaniyatlar. Buning uchun zarur shart

sitokininni 4 - 45 mkM / l konsentratsiyadagi muhitga kiritishdir.

Kallusdan qoching. Ushbu mikroko'paytirish usuliga asoslanadi

eksplant hujayralar qobiliyatidan foydalanish yotadi

differentsiatsiya qiladi va kallus hosil qiladi. Qachon u o'zgaradi

kallusdan fitohormonlarning konsentratsiyasi kurtaklarni qayta tiklashi mumkin

yoki embrionlar. Keyinchalik kallusni ommaviy ishlab chiqarish

asir hosil bo'lishini ideal usul deb hisoblash mumkin

keng ko'lamli naslchilik, lekin hozirda

Foydalanishni cheklaydigan ikkita asosiy kamchilik mavjud

bu yondashuv. Ko'pgina kalluslarning kurtaklar nishini qayta tiklash qobiliyati

yetishtirish va transplantatsiya paytida kamayadi yoki hatto yo'qoladi

kallus to'qimasi. Shu bilan birga, soni

poliploid, aneuploid va boshqa genetik jihatdan o'zgartirilgan

hujayralar va, demak, kallusdan hosil bo'lish ehtimoli

asl ota-ona shaklidan farq qiladigan o'simliklar.

Madaniy hujayralardagi sitogenetik o'zgaruvchanlikning sabablari

xilma-xil, keng bo'lishiga qaramay, uning mexanizmi hali ham aniq emas

ushbu hodisaning tarqalishi. Bularning barchasi bilan farqlash mumkin

madaniyatning genetik o'zgarishi uchun mas'ul bo'lgan bir qator omillar

hujayralar:

 eksplantni izolyatsiyalashda korrelyativ munosabatlarning buzilishi;

- atrof-muhit komponentlarining harakati;
 atrof-muhitda to'plangan metabolik mahsulotlarning ta'siri;

 manba materialining heterojenligi va hujayra tanlanishi

ma'lum bir tur.

Torreyning kontseptsiyasiga ko'ra, kinetin parchalanishni keltirib chiqaradi

asosan heterojen eksplantning poliploid hujayralari.

Poliploid hujayralar faol ravishda ko'payadi, natijada

ularning aholi orasida oshib borayotgan ustunligidir. Bu hukm

Buni ko'rsatgan Kunax va Alpatovalarning ishlarida o'z tasdig'ini topdi

shunga o'xshash ekzogen o'sish regulyatorlaridan uzoq muddatli foydalanish

sitokininlar, ploidiya va hosil bo'lishining oshishiga olib keladi

haplopappus to'qima madaniyatida miksoploid hujayralar. Muhimi, bu

bilan haplopappusning uzoq muddatli shtammlarini poliploidizatsiyasi

ularni fitohormonlarsiz muhitda etishtirish sezilarli darajada sekinlashadi.

Madaniyatli hujayralarning sitogenetik o'zgaruvchanligi bilan bog'liq

ozuqa muhitida va auksinlarda mavjudligi, ayniqsa 2,4-D, qaysi

diploidning endoreduplikatsiyasi yoki endomitozini keltirib chiqarishi mumkin

in vitroda o'simlik hujayralari yadrolari.

Ba'zi hollarda heterojen hujayralardan o'simliklarning yangilanishi

morfologiyasi o'zgargan o'simliklarning paydo bo'lishiga olib keladi:

barglarning tartibsiz venalanishi, tartibni buzish

barglar,

qisqa bo'y,

xunuklik va

kamayadi

Shunday qilib, kallusdan tiklangan pelargonium o'silari,

hajmi, bargi va gul morfologiyasi bilan bir-biridan farq qiladi.

O'simliklarning o'zgaruvchanligi kallus va uning yoshiga bog'liq

kelib chiqishi. Oddiy hujayralar poya kallusidan farqlanadi.

o'simliklar va ildizdan kelib chiqqan kallusdan hosil bo'ladi

tashqi patologiyasi bo'lgan o'simliklar. Bu o'zgarishlar deb taxmin qilinadi

xromosoma aberatsiyasi va gen mutatsiyalari bilan bog'liq.

Biroq, sitogenetik haqida gapirish mubolag'a bo'ladi

o'zgaruvchanlik anomalning qayta tiklanishi uchun javobgardir

o'simliklar. Modifikatsiyaning roli

o'zgaruvchanlik. Buni ko'rsatadigan ko'plab ma'lumotlar to'plangan

sharoitlar o'zgarganda displazi yo'qoladi

yetishtirish. Masalan, kallus hujayralari madaniyatida olingan

kartoshka o'simliklaridagi morfologik og'ishlar (mittilik,

cho'zinchoq barglari) yo'qolib ketdi, chunki bu o'simliklar so'qmoqlardan ko'paytiriladi.

yetishtirish. Shunday qilib, har safar regeneratsiya mavjud

kallusdagi g'ayritabiiy o'simliklar, savolni hal qilish kerak: ular bormi

bu kasalliklar irsiy xususiyatga ega yoki metamorfozdir.

Kallus o'sishi davrini 3 - 4 o'tishgacha qisqartirish, olib tashlash

past yordamida kallus to'qimalarining eski va nekrotik joylari

fitohormonlarning kontsentratsiyasi xavfni sezilarli darajada kamaytirishi mumkin

heterojen nasllarni olish.

Klonal mikroko'paytirishning ushbu usulining yana bir kamchiligi, taxminan

Yuqorida aytib o'tilgan morfogenetik salohiyatni yo'qotishdir

in vitroda uzoq muddatli madaniy to'qimalar va hujayralarda. kallus hujayralari

uzoq muddatli madaniyatda ko'pincha asirlarni qayta tiklashga qodir emas va

ildizlar yoki embrioid farqlanishi. Adabiyot muhokama qiladi

bu hodisaning sabablari haqida savol. Ikki nuqtai nazar ustunlik qiladi.

Birinchi (genetik kontseptsiya) ga ko'ra, morfogenetikning yo'qolishi

potentsial sitogenetik o'zgarishlarga bog'liq

yetishtirilgan

hujayralar (poliploidizatsiya, aneuploidizatsiya,

xromosoma aberatsiyasi, gen mutatsiyalari). genetik jihatdan o'zgartirilgan

in vitro madaniyatida selektiv afzalliklarga ega bo'lgan hujayralar,

morfogenezga qodir bo'lgan normal hujayralarni asta-sekin almashtiring.

Ikkinchi nuqtai nazar - qobiliyatni tan olishdir

tufayli amalga oshirilmaydi morfogenez uchun madaniyatli hujayralar

qaytariladigan fiziologik yoki epigenetik o'zgarishlar,

hujayralarda uchraydi. Tajribalar buni tasdiqlaydi

eski aneuploiddan o'simliklarni qayta tiklashga muvaffaq bo'lgan

tamaki kallusi. Boshqa mualliflarning fikriga ko'ra, embriogenik potentsial

uzoq muddatli o'stiriladigan sabzi kallusini tiklash mumkin

kinetinni ozuqaviy muhitga kiritish yoki davolash

sovuq bilan o'stirilgan to'qimalar.

Kamaytirishning aniq sabablari haqidagi savolni chetga surib qo'yamiz

yetishtirilgan hujayralarning morfogenetik salohiyati bo'lishi kerak

Ushbu hodisaning turlarga mansubligi bilan shubhasiz aloqasiga e'tibor bering

o'simliklar. Shunday qilib, agar ko'pchilik donli o'simliklarning kallusi yo'qolsa

birinchi oylarda morfogenez qobiliyati

yetishtirish, tamaki kallusi qobiliyatini saqlab qoladi

4 yil ichida organ shakllanishi.

7-rasm
Guruch. 7. Oziq moddasida kallus to'qimalaridan kurtaklar hosil bo'lishi

muhit.

Kallus hujayralarining sitogenetik o'zgaruvchanligiga qaramasdan va

kalluslarning ko'payishi, undan keyin kurtaklar qayta tiklanishi

samarali va ba'zi hollarda yagona mumkin

to'qima madaniyatida o'simliklarni ko'paytirish usuli. Shubhasiz bu

usul faqat u ko'rsatilgan o'simliklar uchun qo'llanilishi mumkin

kallus to'qimalarining genetik barqarorligi yoki agar

qayta tiklangan o'simliklar orasidagi o'zgaruvchanlik oshmaydi

tabiiy o'zgaruvchanlik darajasi. Adabiyotga ko'ra,

odatda amaryllis, dracaena, pomidorlarning kallus kurtaklarini qayta tiklash

normal o'simliklarning shakllanishiga olib keladi.

Shu munosabat bilan ish olib borilmoqda

hujayra suspenziyasi madaniyati yordamida mikroko'paytirish

o'simliklar. Darzanga ko'ra, Amerikaning yuz kunlik kallusi

qarag'ay suspenziya madaniyatiga o'tkazilishi kerak, yetishtiriladi

bir necha oyga to'xtatib turish va keyin qayta o'tkazish

kallus hosil bo'lishi uchun agar muhit. Kallusda paydo bo'ladi

o'simliklar morfologik jihatdan amerikalik ko'chatlardan farq qilmaydi

qarag'ay.

Ko'rinishidan, ideal kallusni qondirish kerak

quyidagi talablar:

1. genetik jihatdan barqaror diploidni o'z ichiga oladi

meristematik hujayralar, ildiz tepa hujayralariga o'xshash va

doimiy ravishda ko'payish qobiliyatiga ega;
2. keyin ko'p sonli regenerativ o'simliklar hosil qiladi

ozuqa muhitining tarkibiy qismlarida tegishli o'zgarishlar.

Kallusning totipotentligini saqlashning zaruriy sharti va

undan faqat kerakli turdagi o'simliklarni qayta tiklash - konservatsiya

diploid meristematik hujayralarning ma'lum nisbati

tasodifiy farqlanuvchi hujayralar sonining tobora ortib borishi,

o'simliklarni shakllantirishga qodir emas.

Kallus yoki hujayra suspenziyasidan embrioidogenez ko'rinadi

juda istiqbolli va ko'plab tadqiqotchilar ushbu yondashuvdan foydalanadilar

klonal bilan

mikroko'paytirish. Hozirda

butun uchun olingan embrioidogenez orqali o'simliklarning ko'payishi

bir qator muhim qishloq xo'jaligi ekinlari: makkajo'xori, javdar, tariq,

guruch, shakarqamish va boshqalar Biroq, amaliy foydalanish

bu usul oz sonli o'simlik turlari bilan chegaralanadi

Virussiz ekish materialini olish

Aksillar madaniyati bilan ko'payadigan o'simliklar va

deyarli har doim 1-2 mm uzunlikdagi otishma uchlaridan olinadi

ona o'simlikida mavjud bo'lgan viruslar bilan kasallangan.

Viruslar turli oilalardagi o'simliklarni yuqtiradi, 300 ga yaqin

qishloq xo'jaligi ekinlarining kasalliklari, shu bilan hosilning pasayishi

va uning sifati. Virusli infektsiyalar ayniqsa zararli

tungi soyalar oilasiga mansub oʻsimliklar. Virusli o'simlik kasalliklari oson

vegetativ koʻpayish orqali naslga oʻtadi. Bularga qarshi kurash

kasalliklar viruslarning majburiy parazit ekanligi va ularning

halokat xost hujayralarining o'limi bilan birga keladi. Jang qilmoq

virusli infektsiyalar, butun chora-tadbirlar tizimi ishlab chiqilgan,

tabiatda profilaktika, chunki davolash uchun

virusdan ta'sirlangan o'simliklar mumkin emas. Bularga kiradi

virusga chidamli navlarni etishtirish. Biroq,

esda tutingki, chidamli o'simliklarda virus o'zini e'lon qilmaydi

xarakterli alomatlar paydo bo'lishi, uzoq vaqt bo'lishi mumkin

yashirin holatda mavjud. Bundan tashqari, etishtirish

chidamli yonida chidamli o'simliklar kiruvchi bilan to'la

oqibatlari - hasharotlar viruslarni ikkinchisiga o'tkazishi mumkin.

Virus tarqalishini cheklash choralari

infektsiya - olingan ekish materialidan foydalanish

sog'lom o'simliklar. Viruslarni olib tashlash uchun ishlatiladigan usul

1934 yilda Uayt usulining asoschisi viruslar yo'qligini ko'rsatdi

yuqtirilgan o'simliklarning ildiz uchlari. Ushbu faktlarga asoslanib,

Frantsuz olimlari Morel va Martin olish usulini taklif qilishdi

yetishtirilgandan boshlab sog'lom (virussiz) o'simliklar

apikal meristemalarning ozuqa muhiti. Ushbu usulga ko'ra,

apikalning juda kichik qismini (0,3 - 0,5 mm) o'stiring

to'qima - odatda meristematik to'qima va 1-2 barg

primordia. Ko'rinishidan, viruslar poyaga kira olmaydi

apeks boshqa to'qimalarda bo'lgani kabi bir xil qulaylik bilan yoki, holda

ularning kirib borishi, replikatsiyasi o'simlikning reaktsiyasi bilan bostiriladi

cho'qqisini kesish natijasida kelib chiqqan shikastlanish. Biroq, bu istisno qilinmaydi

ba'zi boshqa omillar. Umuman olganda, kichikroq

madaniyatli apikal to'qimalar, qayta tiklanish imkoniyati qanchalik yuqori bo'lsa

virussiz o'simlik, garchi o'sish tezligi va

eksplantlarning hayotiyligi mos ravishda pasayadi.

Infektsiyani kamaytirish uchun, avval ona o'simlik

apikal meristematik to'qimalarning izolyatsiyasi termal ta'sirga duchor bo'ladi

issiqlik bilan ishlov berish (30-40 0S da 6 - 12 hafta). Usul

termoterapiya ham in vivo, ham in vitro qo'llaniladi. Uchun

jarayonda viruslardan ajralib chiqish mexanizmini tushuntirish

Termoterapiyada turli xil farazlar mavjud. Ulardan biriga ko'ra,

yuqori harorat virusga bevosita ta'sir qiladi

zarralar ribonuklein kislotasi va oqsil qobig'i orqali,

jismoniy halokatga olib keladi va virusli zarralarni yo'qotadi

infektsiyalilik. Ikkinchi gipoteza juda yuqori

harorat o'simlik metabolizmi orqali viruslarga ta'sir qiladi. ostida

yuqori haroratning ta'siri sintez o'rtasidagi muvozanatni buzadi

va virusli zarralarning degradatsiyasi. Agar sintez ustunlik qilsa, demak

infektsiyalangan to'qimalarda virusning kontsentratsiyasi ortadi va aksincha. O'simliklar,

Termoterapiyadan o'tayotganlar maxsus termal kameralarga joylashtiriladi,

bu erda birinchi haftada harorat 25 0S dan 37 0S gacha ko'tariladi

haroratni har kuni 20C ga oshirish orqali. Qachon juda muhim

Termoterapiya butun jarayon davomida yaratadi va saqlaydi

optimal rejim: harorat 37 0S, lampalar bilan yoritish

kunduzi 5000 lx, fotoperiod 14-16 soat nisbatan

issiqlik kamerasidagi namlik 90%.
Termoterapiya davomiyligi virusning tarkibiga va uning tarkibiga bog'liq

issiqlikka chidamlilik. Misol uchun, chinnigullar uchun 10 dan 12 haftagacha etarli.

issiqlikka ta'sir qilish va xrizantemalarni B-virusidan ozod qilish, bu

davr 12 yoki undan ortiq hafta davom etadi. Biroq, o'simliklar mavjud

cymbidium, atirgullar va boshqalar, natijada o'sishi inhibe qilinadi

in vitroda uzoq muddatli termoterapiya. Bunday o'simliklar uchun tavsiya etiladi

in vitroda qayta tiklangan o'simliklarning termoterapiyasini o'tkazish.

Termoterapiyaning infektsiyani kamaytirishga ta'siridan tashqari

o'simliklar, yuqori haroratning ijobiy ta'siri

ba'zi gul ekinlarining o'sish nuqtasi va morfogenez jarayonlari

(chinnigullar, xrizantema, freziyalar) in vitro sharoitida. Ilova

Termoterapiya ko'payish omilini 50 ga oshirishga imkon beradi -

60%, probirkali o'simliklarning tuproqqa moslashuvini oshirish

sharoitlar, shuningdek, virussiz yuqori foizga ega bo'ling

ona o'simliklari.

Termoterapiyani meristem madaniyati bilan birgalikda qo'llash

dan regeneratsiya qilingan o'simliklarning 70% dan ko'prog'ini yaxshilash imkonini beradi

virusli xloroz, 90% qulupnay o'simliklari, 25% qora va qizil

smorodina, 50% malina, 80% dan ortiq kartoshka. O'simliklarni tekshirish

viruslarning mavjudligi odatda amalga oshiriladi

yordamida

ferment immunoassay, elektron mikroskop va otsu

ko'rsatkichli o'simliklar.

O'simliklardan ozod qilishning yana bir usuli

viruslar - kimyoterapiya. Bu ozuqaviy moddalarga qo'shilishdan iborat

apikal meristemalar yetishtiriladigan muhit, analog

guanozin - 1b-D-ribofuranosil-1,2,4-triazol-3karboksimid (virozol)

20-50 mg / l konsentratsiyada. Ushbu antiviral preparat mavjud

faoliyatning keng spektri. Virozoldan foydalanganda

madaniyat muhitida virussiz o'simliklarning foizi ortadi

Nazoratdagi 0-41% bilan solishtirganda 80-100% (bular uchun umumiy bir qator uchun

virusli o'simliklar). Kimyoterapiyaning ijobiy natijalari bo'ldi

olxo'ri, gilos, malina, ba'zi gulli va boshqalar uchun olingan

o'simliklar.

Hozirgi vaqtda apikal madaniyat usuli

meristematik to'qimalar shifo uchun keng qo'llaniladi

ko'p mevali ekinlar. Masalan, Belle de Fontaine kartoshka navi,

viruslar bilan kasallanish natijasida deyarli yo'qolgan edi

infektsiyalangan odamdan olingan sog'lom meristemadan qayta tug'iladi

o'simliklar va in vitroda etishtiriladi.

O'simlik to'qimalarini o'stirish bosqichlari va texnikasi

klonal mikroko'paytirishning turli bosqichlari

Mikroko'paytirish jarayoni ketma-ket ketma-ketlikdan iborat

operatsiyalar, ularning har biri o'ziga xos xususiyatlarga ega. Bosqichlar

klonal mikroko'paytirish:

 mos eksplantlarni tanlash, ularni sterilizatsiya qilish va o'tkazish

ozuqaviy muhit;

- aslida mikroko'paytirish;

 asirlarning ildiz otishi, ularning keyinchalik tuproqqa moslashishi

shartlar;

- issiqxonada o'simliklarni etishtirish va ularni tayyorlash

dalaga qo'nish.

men bosqich. Eksplantni tanlashda ikkala turni ham hisobga olish kerak

o'simliklar, shuning uchun

va mikroko'paytirish usuli

foydalanilsin. Mikroklonlarni olish jarayoniga yil fasli va ta'sir qiladi

ona o'simlikning rivojlanish bosqichi, ko'p jihatdan eksplantning reaktsiyasi

o'simlikning qaysi qismidan kelib chiqishiga bog'liq. Garchi ko'pchilik

o'simliklar faol fazada madaniyatga kirishga yaxshi yordam beradi

o'sishi, ba'zi o'simliklarning eksplantlari faqat fazada kurtaklar hosil qiladi

dam olish. Lily lampochka shkalasi eksplantlarini olish oson

bolalarni qayta tiklash, agar ular yozda yoki emas, balki bahorda yoki kuzda olingan bo'lsa

qish davri. Chinnigullarning apikal meristemasi ajratilgan

Mart, hayotiy o'simliklarning eng yuqori foizini beradi. Qanaqasiga

o'simliklarning mutlaq yoshi qanchalik past bo'lsa, o'sish shunchalik intensiv bo'ladi

otadi. Bu qaramlik ayniqsa yog'ochda yaqqol namoyon bo'ladi

o'simliklar.

Eksplantni izolyatsiya qilish va uni sterilizatsiya qilish haqida gapiradigan bo'lsak, bu mumkin emas

ota-ona o'simliklarini maxsus tayyorlash masalasini chetlab o'tish -

sterilizatsiya muvaffaqiyatiga ta'sir qiluvchi eksplant donorlari.

Rozetli o'simlikning steril madaniyatini olish uchun

rudbeckia qisqa kundan bir necha kungacha tavsiya etiladi

poyani cho'zish uchun uzoq kun sharoitlariga o'tkazish. Bu

butunlay erdan yuqorida barglarning rozet shakllanishiga olib keladi

sterilizatsiya eritmalari yaxshi natija beradi.

Gerbera - poyasi qisqartirilgan rozetli o'simlik.

cho'qqisi bilan birga erga botiriladi. Bundan tashqari, qochishning uchi

ko'p sonli tuklar bilan qoplangan, ular orasida to'planadi

kichik zarralar

yer. Bularning barchasi sterilizatsiyani qiyinlashtiradi.

umumiy qabul qilingan chora-tadbirlar. Va faqat qo'nish yo'lini o'zgartirish orqali

ona o'simliklar, qoniqarli olish mumkin edi

natijalar. Ona o'simliklar shunday ekilgan bo'lishi kerak

poyaning o'sish nuqtasi erdan yuqoriga ko'tarilgan.

Deberg va Mein maxsus nol bosqichini izolyatsiya qilishni tavsiya qiladi

mikroko'paytirish, uning maqsadi o'simliklarni tayyorlash bo'lishi kerak

eksplantlarni ajratib olish uchun.

Nolinchi bosqichda o'simliklar issiqxonalarda o'stirilishi kerak

past namlik va cheklangan sug'orish. Suv kerak

maxsus kapillyarlar orqali tuproqqa kirib, olish

to'g'ridan-to'g'ri ildizga. Yuqoridan sug'orishdan qochish kerak. Bular

sharoitlar o'simlik o'sishi uchun butunlay qulay emas, lekin ayni paytda keskin

kasallangan o'simliklar soni kamayadi. Bir necha uchun

Eksplantni izolyatsiya qilishdan bir necha hafta oldin o'simliklar davolanadi

pestitsidlar va uning eksplant bo'lib xizmat qiladigan qismi,

patogenlarni o'tkazmaslik uchun gazli sumka bilan qoplangan

hasharotlar.

Ozuqa muhitining kimyoviy tarkibi, fizik xossalari

atrof-muhit bajaradigan vazifalarga mos kelishi kerak

mikroko'paytirishning har bir bosqichi. Birinchi bosqichda,

ozuqaviy muhitga ko'pincha antioksidantlar (sistein, glutation,

askorbin kislotasi) oldini oladi

harakat

eksplantni izolyatsiya qilish bo'yicha barcha operatsiyalarni bajarishni taklif qiladi

askorbin kislotasi bilan singdirilgan filtr qog'ozi va ichida

eksplantni tayyorlash vaqti va ularni ko'chirib o'tkazish jarayonida suvga cho'mdirish

antioksidantlarni o'z ichiga olgan eritmadagi to'qimalar.

Faollashtirilgan ko'mir qo'shilishi foydali ta'sir ko'rsatadi

kurtaklar o'sishi. Faollashtirilgan uglerod adsorbsiyalanadi

zaharli moddalarni eksplant qilish. Shu bilan birga, uglerod adsorbsiyalanadi

ommaviy axborot vositalari va biologik faol moddalar, bu sezilarli darajada kamaytiradi

ularning asl kontsentratsiyasi.

8-rasm. Atirgullarni mikroko'paytirish. 1 - atirgul o'simliklari; 2-3 -

so'qmoqlar; 4 - eksplantlarni sterilizatsiya qilish; 5 - asirlarning shakllanishi; 6

– mikroo‘simliklarning rizogenezi; 7- qozonlarda mikroo'simliklar ekish; 8 -

ildiz otishi va omon qolish uchun yuqori namlikni saqlab turish

issiqxonada mikroo'simliklar.

fitohormonlarning yuqori konsentratsiyasini kiritish.

Mikroko'paytirishning birinchi bosqichining ahamiyati shundan iboratki

butun

tarkibida yuqori konsentratsiyali mineral tuzlar, uglevodlar,

vitaminlar, sitokininlar va auksinlar, ba'zan gibberellinlar.

II bosqich - haqiqiy ko'payish. Ba'zi hollarda, kompozitsion

ikkinchi bosqichda (haqiqiy ko'payish) ozuqa muhiti qoladi

oldingi. Boshqa hollarda, u qodir gormonlar bilan boyitiladi

in vitro morfogenetik reaktsiyalarni keltirib chiqaradi.

Ko'pgina hollarda tadqiqotchilar atrof-muhitni afzal ko'radilar

Murashige va Skoog. Ekzogen yordamida morfogenezni tartibga solish

fitohormonlar klonal mikropropagatsiya asosida yotadi

o'simliklar. Eng ko'p ishlatiladigan sitokininlar orasida kinetin, BAP,

zeatin, auksinlar - IAA va NAA 0,5 mg / l gacha konsentratsiyalarda.

Bilan ommaviy axborot vositalarida aksillar grechka kurtaklarini etishtirishda

sitokininlarning turli konsentratsiyasi, eng yaxshi natija edi

BAPni 0,5 - 1 mg / l konsentratsiyada qo'llashda olinadi, shuningdek

BAP (2,23 mg/l) + IAA (0,175 mg/l). Qizig'i shundaki, chorshanba kuni

tarkibida 2,23 mg/l BAP va 0,175 mg/l IAA rivojlanayotgan kurtaklar mavjud

rozet shakliga ega bo'lgan, ularning internodalari uzaytirilmagan, davom etayotganda

faollashtirish bilan bir vaqtda 0,5 mg/l BAPni o'z ichiga olgan muhit

qo'ltiq osti kurtaklari cho'zilgan. Bu ishni osonlashtirdi

bir tupdan bitta kurtakni ajratib olish va ildiz otishda uni ko'chirib o'tkazish.

Bundan tashqari, 0,5-1 mg/l BAP bo'lgan muhitda ko'paytiriladigan kurtaklar tezroq.

shakllangan ildizlar.

BAP kontsentratsiyasining sezilarli darajada 1,5 mg / l gacha oshishi

aksillar asirlari shakllanishiga to'sqinlik qildi va paydo bo'lishiga olib keldi

kichik xunuk, yomon rivojlangan buyraklar. Konsentratsiyani pasaytirish

0,1 mg/l ham qo'ltiq osti kurtaklari rivojlanishiga to'sqinlik qildi va sabab bo'ldi

ko'p sonli generativ kurtaklarning boshlanishi va ildizlarning shakllanishi

kesishning asosi. Biroq, shuni ta'kidlash kerakki, atrof-muhitga kirish

Past konsentratsiyada IAA (2,23 mg/l BAP va 0,175 mg/l IAA)

BAP ning yuqori konsentratsiyasining inhibitiv ta'sirini olib tashladi va

aksillar asirlari hosildorligini oshirishga yordam berdi. Va

BAPning past konsentratsiyasidan (0,1 - 0,5 mg/l) foydalanish o'zini isbotladi
tatarlarning klonal mikroko'payishi uchun samaraliroq

grechka ekishdan ko'ra.

Lundergan va Janik bilan BAP 5 mg/l konsentratsiyada ekanligini aniqladi

bir tomoni aksiller kurtaklarning maksimal rivojlanishiga sabab bo'ldi

hujayra madaniyatida olma daraxtlari, lekin boshqa tomondan, paydo bo'lishiga olib keldi

yomon o'lchamli kurtaklar. Shu bilan birga, BAP kontsentratsiyasida

Kurtaklardan 1 mg/l normal kurtaklar hosil bo'lgan va bir vaqtning o'zida

tezlikda faqat bir oz pasayish kuzatildi

mikroko'paytirish. Popov va Vysotskiyning so'zlariga ko'ra, uzoq muddatli

yuqori tarkibga ega bo'lgan ommaviy axborot vositalarida qulupnay kurtaklarini etishtirish

Ba'zi hollarda BAP, passiv shakllanishi

qo'ltiq osti meristemalarini ko'paytirishga qodir bo'lmagan buyraklar yoki

ildiz shakllanishi. Ko'rinishidan, asirlarni etishtirish jarayonida

ularning to'qimalarida yuqoridagi fitohormonlarning asta-sekin to'planishi mavjud

zarur fiziologik daraja va ayni paytda ularning

toksik ta'sir. Sitokininlarning salbiy ta'siri mumkin

madaniy vositalardan minimal foydalanish orqali yengish

sitokininlar kontsentratsiyasi, barqarorlikni ta'minlaydi

ko'payish omili yoki kultivatsiya davrlarining almashinishi

past va yuqori darajadagi sitokininlar bo'lgan muhitda.

III-IV bosqichlar - mikrokurtaklarning ildiz otishi, ularning keyingi

tuproq sharoitiga moslashish va dalaga tushish. Bu eng ko'p

klonal muvaffaqiyatga erishadigan vaqt talab qiluvchi qadamlar

mikroko'paytirish. Erga ildiz otish va ekish bosqichida, odatda

muhit tarkibini o'zgartirish. Tuzni kamaytiring va

uglevodlar, sitokininlarni chiqarib tashlang va auksinlarni qo'shing. Tanlov

normal ildiz otish uchun zarur bo'lgan auksin konsentratsiyasi

qochish bir qator sabablarga bog'liq. Ular orasida biz merosxo'rlarni nomlaymiz

turlarga qarab kurtaklarning ildiz otishiga moyilligi

va ona o'simliklarning nav xususiyatlari, turi

auxin, shuningdek, fitohormonlarning kontsentratsiyasi va nisbati bosqichda

otishmalarning tarqalishi. Oksinlarning ildiz otishdagi samaradorligi

asirlari yuqori dozalar ta'sirida sezilarli darajada kamayadi

sitokininlar birinchi va ikkinchi davrda ozuqaviy muhitga kiritilgan

mikroko'paytirish bosqichlari. Ehtimol uchun foydalidir

erta bosqichlarda etishtirish, ko'proq bilan birinchi ommaviy axborot vositalaridan foydalaning

sitokininlarning yuqori, keyin esa past konsentratsiyasi.
Ba'zi hollarda

ildiz shakllanishi rag'batlantiriladi

xlorogen yoki ferul kislotalarining qo'shilishi. Siz ham mumkin

dan olingan asirlarning bazal qismini qayta ishlashni tavsiya eting

probirkalar, aoksin tipidagi stimulyatorlarning eritmalari yuqori

3-6 soat davomida kontsentratsiyaga o'tkazing, so'ngra ularni ildizga kiriting

gormonsiz agar muhiti yoki mos in vitro

substrat. Bu usul ba'zi hollarda doimiydan afzalroqdir

muhitda auksinlarning mavjudligi.

Mikroklonlarni erga ekish uchun eng yaxshi vaqt

ildizlar o'sishni boshlagan davr va yosh barglar

etarlicha rivojlangan va fotosintezga qodir bo'ladi, bu

zavodga to'liq avtonomiya beradi. Erga tushishdan oldin

yoritish, qoida tariqasida, 10 000 lyuksgacha oshiriladi. yuqori

Yorug'lik intensivligi o'simlikning o'sishiga to'sqinlik qilishi va sabab bo'lishi mumkin

engil xloroz, ammo, tuproqdagi bu o'simliklar his qiladi

bo'lmagan o'simliklarga qaraganda ancha yaxshi va kuchliroq o'sadi

yuqori yorug'lik intensivligiga oldindan qotib qolgan.

Naycha transplantatsiyasi uchun eng qulay vaqt

yerdagi o'simliklar - bahor yoki yozning boshi. Ikki yoki uchta o'simliklar

barglari va rivojlangan ildiz tizimi idishlardan ehtiyotkorlik bilan chiqariladi

yoki pinsetli probirkalar. Ildizlar agar va qoldiqlaridan yuviladi

ilgari tuproq substratiga ekilgan

85-90 0C da 1-2 soat sterilizatsiya qilinadi.Ko'pchilik uchun

O'simliklar substrat sifatida quyidagi aralashmalardan foydalanadilar

nisbatlar: torf: qum (3: 1); torf: torf er: perlit (1:1:1);

torf : qum : perlit (1: 1: 1). Sho'ng'in qutilari yoki hijob

regenerativ o'simliklar yetishtiriladigan idishlar to'ldiriladi

oldindan tayyorlangan tuproq substrati.

Ma'lumki, havoning nisbiy namligi da

bir idishda asirlarni etishtirish 100% ga etadi. Shuning uchun, asosiy

regeneratsiya qilingan o'simliklarni eks vitro iqlimlashtirish vazifasi

keyingi birinchi kunlarda nisbatan yuqori havo namligini yaratish

transplantatsiya, chunki sezilarli suv yo'qotishlariga olib kelishi mumkin

mikroklonlarning o'limi. O'simliklarning yaxshi rivojlanishi uchun sharoitlar yaratiladi

sun'iy tuman. Yaratish mumkin bo'lmagan hollarda

bunday sharoitlarda o'simliklar bilan idishlar shisha bilan qoplangan

bankalar yoki plastik qoplar. Bilan sharoit yaratmasdan

yuqori namlik juda tez quriydi

regenerantlarda barglar va keyingi o'simliklar o'limi. Shunday bo'lishi mumkin

o'simliklarning nobud bo'lishining sabablaridan biri suvdir

barglarning yuqori transpiratsiya faolligi tufayli hosil bo'lgan etishmovchilik

va ildizlarning past singdirish qobiliyati. Bundan tashqari, ortiqcha

suv yo'qotilishi kutikulyar mumning etishmasligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin

in vitro sharoitda yetishtiriladigan kurtaklar. Omon qolishni yaxshilash uchun

erga ekilgan o'simliklar, ular qattiqlashadi: 1-1,5 ichida

haftalar ochiq havoda qolish muddatini oshiradi

havo.

davomida in vitro o'stirilgan o'simliklar barglarining tez suvsizlanishi

ularni dalaga ko'chirish vaqti: butun davomida barglar

iqlimga moslashish davri 50% suv bilan püskürtülmelidir

glitserin eritmasi yoki kerosin (yog ') va dietil efir aralashmasi

(1:1). Ushbu usulni qo'llash uzoq va oldini olishga yordam beradi

probirka zavodlarining qiyin qattiqlashuv jarayonlari va

100% omon qolishni ta'minlaydi.

Ekishdan 20 dan 30 kun o'tgach, yaxshi tashkil etilgan o'simliklar

Knudson, Murashige va Skoog, Chesnokov, Knop tuzlari bilan oziqlanadi

(o'simliklar turiga qarab) yoki murakkab mineral

o'g'it. Mikroklonlar o'sib ulg'aygan sayin, ular katta joyga o'tiradilar

yangi substratli idishlar. Keyingi etishtirish

iqlimlashtirilgan o'simliklar qabul qilingan qishloq xo'jaligi amaliyotiga mos keladi

bu turdagi o'simliklarni etishtirish.

Klonalning samaradorligiga ta'sir qiluvchi omillar

mikroko'paytirish

O'simliklarni klonal mikroko'paytirish usulini tanlashda

genetik, fiziologik ta'sirini hisobga olish kerak,

gormonal va jismoniy omillar. Buning sababi shundaki

uchun ma'lum mikroklonlarni olish texnologiyasi ishlab chiqilgan

bir turdagi o'simlik har doim ham boshqa usullarga mos kelmaydi

mikroko'paytirish va bundan tashqari, foydalanish mumkin emas

boshqa turdagi o'simliklar. In vitro ko'payish genotip, yoshga bog'liq

asl o'simlik, izolyatsiyaning mavsumiyligi, shuningdek, asl o'lchami

eksplant. Gormonal omillardan sitokininlar nisbati va

auksinlar, ozuqa muhitining tarkibi va jismoniylardan - kislotalilik
atrof-muhit, yorug'lik sharoitlari, shuningdek, harorat va

nisbiy namlik.

Genetik va fiziologik omillar. Eng katta ta'sir

yetishtirilgan to'qimalar va organlarning morfogenetik salohiyati

genetik omillar bilan ta'minlanadi. Demak, ikki pallali otsimon

dan ko'ra o'simliklarning qayta tiklanish qobiliyati aniqroq

monokotlar.

Adabiyotlarda navning ahamiyati haqida ko'plab havolalar mavjud

mikroko'paytirish jarayonidagi xususiyatlar. Qora rangning turli navlarida

smorodina, ildiz hosil qilishda sezilarli farq bor

izolyatsiya qilingan otishma maslahatlarining qobiliyatlari. Qayta tiklanadigan

freziyaning qobiliyati ham ko'p jihatdan navga bog'liq edi

atrof-muhitdagi fitohormonlarning nisbati va kontsentratsiyasiga qaraganda farqlar.

Qumli o'simliklarda cho'qqilar izolyatsiya qilinganligi ko'rsatilgan

turli navlar ozuqa moddalarining mavjudligiga turlicha munosabatda bo'ladi

o'sish regulyatorlari muhiti. Qatronlar navining tepalari javob bermadi

ozuqa muhitiga IAA va 2,4-D qo'shilishi va Istrinskiy-15 navida.

0,05 mg/l IAA va 0,05 mg/l 2,4-D bilan muhitda kurtaklar o'sishi ortdi.

Izolyatsiya qilingan krijovnik cho'qqilari uchun,

sharoitlarga morfogenetik javoblarning navli farqlari

yetishtirish. Shunday qilib, cho'qqilar ozuqaviy muhitda etishtiriladi

Murashige va Skuga BAP qo'shilishi bilan 0,5 mg/l, Finik navida

proliferatsiyalangan kallus, undan keyin kurtaklar hosil bo'lgan va

rus, Kolobok, Pushti navlarining cho'qqilari qobiliyatiga ega edi

to'g'ridan-to'g'ri regeneratsiya. Nav o'ziga xosligi qachon o'zini namoyon qilishi mumkin

mikrokurtaklarning ildiz otishi. Misol uchun, gilos mikroskopi uchun shunday edi

Shubinka navida IBA bilan davolashdan keyin (50 mg/l)

Mikroto'qimalarning 52%, Vladimirskaya navida - 18% va navda ildiz otgan

Lyubskaya - 13%. Qora smorodina turli navlari uchun ham

ildiz hosil qilish qobiliyatida sezilarli farq bor edi

izolyatsiya qilingan otish bo'yicha maslahatlar.

Morfogenez qobiliyati bir xil va turli organlarda har xil

bir xil o'simlik, shuning uchun klonal texnologiyani ishlab chiqishda

Muayyan madaniyatni mikroko'paytirish har tomonlama talab qilinadi

o'simlikning morfogenetik imkoniyatlarini o'rganish, maqsadi

bu ko'payishning optimal turini tanlashdir. Masalan,

sifatida to'qima madaniyatida freziya morfogenezini o'rganayotganda

Eksplant quyidagi organlardan foydalangan: apikal va aksiller

so'rg'ich segmentlari, generativ kurtaklar, gullar, anteralar,

barg va ildiz qismlari. Eng yaxshi usullar aniqlandi

mikroko'paytirish. Birinchisi - dan tasodifiy kurtaklar nish shakllanishi

gul kurtaklari, so'ngra qo'ltiq osti proliferatsiyasi induktsiyasi

buyraklar. Bir vaqtning o'zida rivojlanishning induktsiyasi

novdalar va rivojlanayotgan kallusning asosidan kelgan tasodifiy kurtaklar

matolar. Ikkinchisi - barcha mavjud korm meristemalarining rivojlanishi.

Uchinchisi - korm to'qimalaridan tasodifiy kurtaklar paydo bo'lishi

va unda rivojlanadigan kallus.

Fiziologik omillarga vaqt (yil fasli) kiradi.

eksplant izolyatsiyasi. Ayni paytda izolyatsiya qilingan to'qimalar va organlar

o'simliklarning o'simliklari, yuqori sezuvchanlikka ega

ozuqa muhitining tarkibi va qodir

tasodifiy kurtaklarni hosil qiladi, kurtaklar hosil qiladi va ildiz otadi,

davrida eksplant sifatida olingan to'qimalar bilan solishtirganda

chuqur va majburiy dam olish. Misol uchun, bahor ekish cho'qqilari

Bektoshi uzumni navlari Murashige va Skoog ozuqa muhitida sana,

BAP 0,5 mg/l o'z ichiga olgan, kallusning ko'payishiga hissa qo'shgan, dan

keyin yuqori bilan kurtaklar nish shakllanishiga sabab bo'ldi

chastota. Shu bilan birga, tepaliklarning yozgi izolyatsiyasi ko'proq rag'batlantirdi

intensiv kallus proliferatsiyasi, lekin foiz

o'qlarning tiklanishi.

Eksplant hajmi ham muvaffaqiyatni belgilovchi omil hisoblanadi

mikroko'paytirish. Eksplant qanchalik kichik bo'lsa, shuncha kichik bo'ladi

qayta tiklash qobiliyatiga ega va aksincha. Eksplantlar

kattaroq, parenxima, o'tkazuvchi to'qima va iborat

kambiy, nima bo'lishidan qat'i nazar, o'z-o'zidan ozuqaviy muhitda bo'lishi mumkin

fitohormonlarning tarkibi, kurtaklar hosil qiladi. Boshqa tomondan, ichida

katta eksplantning hujayralari, paydo bo'lish ehtimoli

viruslar va boshqa patogenlar, bu tiklanishga to'sqinlik qiladi

o'simliklarning to'qima madaniyatida ko'paytiriladi. Optimal qiymat

Eksplant donor o'simlikning tur xususiyatlariga va xususiyatlariga bog'liq

eksplant ajratilgan organ. Hajmi ekanligi aniqlandi

birlamchi malina eksplantining o'lchami 2 mm bo'lishi kerak, bunday bilan

sharoitda apikal meristemalarning 60% ozuqa moddalarida qayta tiklanadi

muhit. Hoplar uchun bu ko'rsatkich 0,1 dan 0,2 mm gacha, piyoz uchun esa

va sarimsoq - 0,5 dan 0,8 mm gacha.

9
9-rasm. Fitotronda klonlangan o'simliklarning javonlari.

Ko'pgina o'simliklarda izolyatsiya qilingan morfogenetik qobiliyat

to'qimalar, xususan, meristematik, joylashishiga bog'liq

asirlaridagi kurtaklari. Shunday qilib, regenerativ qobiliyatni o'rganishda

ruscha krijovnik navining kurtaklari terminali va lateral kurtaklari

eng katta morfogenetik salohiyatga ega ekanligi ko'rsatildi

uchta yuqori buyragi bor. Qushqo'nmas o'simliklarda, pastki qismning kurtaklari

asirlari kurtaklarga qaraganda ko'proq regenerativ qobiliyatga ega

o'rta va apikal qismlar.

Gormonal omillar. Ko'pgina hollarda tadqiqotchilar

Murashige va Skoog muhitlarini afzal ko'ring. O'ziga xos

Ushbu vosita yuqori konsentratsiya bilan tavsiflanadi

noorganik azot. Azot ajralmas element hisoblanadi

ozuqaviy muhit. Morfogenetik salohiyatni amalga oshirish

o'simliklar asosan azot shakli va uning konsentratsiyasi bilan belgilanadi.

Yazavaning so'zlariga ko'ra, Dioscorea qo'ltiq osti kurtaklari o'qqa tutadi

ularni faqat NO3- ioni bo'lgan ozuqa muhitida etishtirish

yoki 4:1 nisbatda nitrat va ammoniy ionlari hosil bo'ladi

havo lampalari. Tarkibida NO3 : NH4+ bo'lgan ozuqa muhitida

V

1: 1 yoki 1: 2 nisbati, dan surgun shakllanishi

Murashige va Skoog ikkala tashkillashtirilmagan jarayonlar uchun ham maqbuldir

o'sish va organogenez jarayonlari uchun. Shu bilan birga, ba'zi hollarda

ozuqa muhitida azot konsentratsiyasini kamaytirish yaxshilanadi

morfogenez, masalan, Bektoshi uzumining Invicta va Karl navlarida,

pomidor. Glxiniya uchun ta'limning bog'liqligi qayd etilgan

ozuqa moddasining tarkibiy qismlaridan vegetativ va reproduktiv tuzilmalar

muhit. Shunday qilib, yuqori konsentratsiyalarda KNO3 (20 mM/l) va saxaroza (100

mM/l) vegetativ kurtaklari, gul kurtaklari asosan rivojlangan

faqat 28% eksplantlarda. KNO3 ning past miqdori bilan (2 mM/l) va

barcha eksplantlarda saxaroza (15 mM/l), faqat hosil bo'ladi

gul kurtaklari.

Klonal mikroko'paytirishning barcha bosqichlarida sifatida

uglerodli oziqlanish manbai 3% saxarozadan foydalanadi. Biroq, bu

kontsentratsiya madaniyatga kiritilgan hamma uchun maqbul emas

in vitro o'simliklar. Saxaroza ekanligi eksperimental ravishda isbotlangan

kapari kurtaklari rivojlanishini yo'naltirishga qodir omil

vegetativ kurtaklar yoki yangilanishning binafsha kurtaklari. Da

o'z ichiga olgan muhitda apikal va lateral kurtaklarni etishtirish

3% yoki undan ortiq konsentratsiyada saxaroza, ko'rinishi

buyraklarning antosiyanin ranglanishi, bu buyraklarning buyraklarga o'tish belgisidir.

qish uyqusi. Pastroqdan foydalanganda

sukroz konsentratsiyasi (3% dan kam), yashil rang hosil bo'lishi

keyingi ko'payish qobiliyatiga ega buyraklar.

Oddiy archa izolyatsiya qilingan embrionlari bilan olib borilgan tadqiqotlarda,

yuqori konsentratsiyaning salbiy ta'sirini ham aniqladi

sukroz (2-3%) tasodifiy kurtaklar shakllanishiga. Bu allaqachon ko'rsatilgan
ikkinchi o'tishda bu jarayon deyarli sodir bo'lmaydi va to

to'rtinchi parcha barcha eksplantlarning o'limini ko'rsatadi. pasaytirish

muhitda saxaroza konsentratsiyasi nafaqat shakllanishini rag'batlantirdi

tasodifiy kurtaklar, balki ularning kurtaklar nishga aylanishi. Da

2-3 oydan keyin surgun muhitida saxarozaning 0,5-1% konsentratsiyasi

yetishtirish 1-1,5 sm balandlikda edi va keyin uchun ishlatiladi

keyingi ko'paytirish yoki ildiz otish.

Klonalning samaradorligiga ta'sir qiluvchi eng muhim omil

mikropropagatsiya - ozuqa muhitining gormonal muvozanati. Da

sitokininning yuqori nisbati: auksin rivojlanishi sodir bo'ladi

qo'ltiq osti meristemalari yoki qo'shimcha kurtaklarning shakllanishi, past -

ildiz shakllanishi induktsiya qilinadi va o'rtacha bilan - sodir bo'ladi

kallus proliferatsiyasi. Eng ko'p ishlatiladigan sitokininlar:

kinetin (6-furfurilmetilaminopurin), BAP (6-benzilaminopurin),

zeatin.

Keling, olib keladigan sitokininlarning funktsiyalarini sanab o'tamiz

o'simliklarning mikroko'payishi. Sitokininlar apikalni engillashtiradi

ustunlik qiladi va qo'ltiq osti kurtaklari rivojlanishini qo'zg'atadi, buzadi

dam olish va dam olish organlarining o'sishini rag'batlantirish. Sitokininlar

somatik embrionlarning o'sishini va o'simliklarning shakllanishini tartibga soladi.

Ular madaniyatda ildiz kurtaklarini farqlash uchun zarurdir.

kallus to'qimalari va eksplant hujayralardan kurtaklar regeneratsiyasi paytida.

Shunday qilib, barcha morfogenetik reaktsiyalar

o'simliklar,

mikroko'paytirish va ularni normal amalga oshirishda qo'llaniladi

ekzogen sitokininlar kerak. Bundan tashqari, sitokininlar

organlarning qarishini sekinlashtiradi va ularning qarshiligini oshiradi

salbiy ekologik omillar.

Bilan ommaviy axborot vositalarida aksillar grechka kurtaklarini etishtirishda

sitokininlarning turli konsentratsiyasi eng yaxshi natija beradi

BAP 0,5 - 1 mg/l konsentratsiyada, shuningdek BAP (2,23 mg/l) + IAA (0,175)

mg/l).

NAA (a-naftilsirka kislotasi), 2,4-D (2,4-diklorfenoksiasetik)

kislota). Oksinlar hujayraning cho'zilishi, bo'linishi va

farqlash. Eng aniq organogen ta'sir

auksinlar - ildiz shakllanishini rag'batlantirish. ularning ta'siri ostida

hujayra boʻlinishi kurtak parenximasida sodir boʻladi. Biroq, auksinlar

shakllangan ildizlarning o'sishiga to'sqinlik qiladi, shuning uchun ortiqcha
auksin kontsentratsiyasi ildizning mo'l boshlanishi bilan tavsiflanadi

rudiments, ularning uzunligi o'sishi sezilarli darajada bostiriladi. Qayerda

ildizlari kenglikda o'sadi. rivojlanish anormaldir

qalinlashgan qisqa ildizlar zaif o'sishga olib kelishi mumkin

in vitro o'simliklar va tuproqqa ko'chirilganda hosil bo'lgan o'simliklarning o'limi.

Izolyatsiya qilingan gerbera kurtaklari o'rta joyga ko'chiriladi

probirkada tarkibida 0,57 – 5,7 mkM/l IAA hosil bo'ldi

normal ildiz tizimi madaniyati. Ildizlar paydo bo'lgandan keyin

o'simliklar jadal rivojlana boshladi. Konsentratsiyani oshirish

Muhitda 5,7 mkM/l gacha bo'lgan IAA ko'plab rivojlanishiga olib keldi

anormal qalinlashgan ildizlar va surgun o'sishining umumiy inhibisyonu.

Oksinlarning yuqori konsentratsiyasi to'liq o'limga olib keldi

o'simliklar.

Ekzogen auksinlar ham lampochkaning shakllanishini rag'batlantiradi

to'qima madaniyati, kallusdan kurtaklar nishini tiklashda ishtirok eting

va to'g'ridan-to'g'ri eksplantning to'qimalaridan.

Gibberellinlar 30 dan ortiq moddalarni o'z ichiga olgan birikmalar sinfidir.

Mikroko'paytirishda asosan gibberlin A3 ishlatiladi

(gibberel kislotasi) yoki qisqartirilgan

GK3. ekzogen

gibberellinlar poya, barglarning o'sishi va cho'zilishini kuchaytiradi,

urug'ning unib chiqishini qo'zg'atish, uyqu holatini olib tashlash. ostida

gibberellinlarning ta'siri pedikellarni uzaytiradi, oshiradi

gullarning hajmi va soni. GK3 ning ozuqaviy muhitiga kiritiladi

asosan shakllangan kurtaklarning o'sishini tezlashtirish va olish maqsadida

yaxshi rivojlangan havo qismi bo'lgan o'simliklar.

Fitohormonlarning muhim roli haqida gapirganda

mikropropagatsiya, shuni ta'kidlash kerakki, ishlatiladigan arsenal

fitohormonlar juda cheklangan. tabiiy fitohormonlar,

muhim morfogenetik ta'sir bilan tavsiflanadi, qimmat, va

ularning mavjud sintetik analoglarining samaradorligi hali ham uzoqdir

xohlaganingizdan. Shuning uchun, ko'plab iqtisodiy foydali o'simliklar uchun

tufayli mikroko'paytirish usullarini amalga oshirib bo'lmaydi

madaniyatda morfogenetik reaktsiyalarni keltirib chiqarishning mumkin emasligi

ma'lum fitohormonlar bilan to'qimalar. Shu sababli, hozirda

jalb qilingan fiziologlar, kimyogarlar, o'simlikshunoslarning diqqatini

yangilarini o'rganishga qaratilgan o'simlik to'qimalarini etishtirish

yuqori morfogenetik bilan gormonal preparatlar

effektlar.
Laboratoriyada R.G. Butenko yangilarning ta'sirini o'rgangan

sintetik o'sish regulyatorlari DRH-4189, tiadiazuron, kartolin,

mikropropagatsiya uchun sitokinin faolligiga ega

gerbera va frezya. Ko'rsatilgandek, har uchala birikma ham

optimal konsentratsiyalar morfogenetik reaktsiyalarni rag'batlantiradi

gerbera va freziyaning to'qimalar madaniyatida. DRH-4189 va tiadiazuron

aksillar meristemalarni faollashtirishda samaraliroq bo'lgan

gerbera asirlari va kartolin - aksillar kurtaklarining qolgan qismini bezovta qilish

frezya qo'ziqorinlari. Shu bilan birga, maksimal rag'batlantiruvchi

DRH-4189 va tiadisaurondagi faollik pastroq bo'ldi

konsentratsiyalari an'anaviy sitokininlar BAP bilan solishtirganda

yoki kinetin. Shunday qilib, bu birikmalar uchun foydalanish

o'simliklar va, xususan, gerberalar va freziyalarni mikroko'paytirish mumkin

madaniy ommaviy axborot vositalari narxining sezilarli darajada pasayishiga olib keladi.

Gormonal bo'lmagan biologik moddalar (vitaminlar,

aminokislotalar, o'simlik ekstraktlari, kazein gidrolizati)

klonal mikropropagatsiya jarayonlariga sezilarli ta'sir ko'rsatadi.

jismoniy omillar. Klonal mikroko'paytirish va o'sish uchun

o'simliklar uchun mavjudligini belgilaydigan muhitning kislotaligi ta'sir qiladi

o'simlik ozuqa moddalari. Yuqori kislotali yoki ma'lum

ishqoriy muhitlar ma'lum elementlarni iste'mol qilishni cheklaydi,

masalan, fosfor va temir, ularni nisbatan erimaydigan qilish, va

bu bilan o'simliklarning o'sishini cheklaydi. Shu bilan birga, yuqori darajada

kislotalilik, boshqa elementlar erigan holatga o'tadi va

Eksplantlar uchun toksik bo'lib qoladi.

Qoida tariqasida, o'simlik to'qimalari va organlari o'stiriladi

pH 5,6-5,8 bo'lgan ozuqaviy muhit. Biroq, bu shartlar har doim ham emas

optimal. Misol uchun, embrionlarning madaniyati uchun ekanligini ko'rsatdi

qarag'ay oddiy muhitning kislotaliligini 5,2 ga o'zgartirish imkonini beradi

2,5-3 baravar ko'payib, qo'shimcha kurtaklarning shakllanishi va madaniyat uchun

Norvegiya archa ichida eng qulay pH hisoblanadi

5.2-5.6. Shunday qilib, madaniy muhitning kislotaligi mos keladi

bu jinslar o'sadigan tuproqlarning kislotaligi

tabiiy sharoitlar. Shuning uchun biotexnologlar hisobga olishlari kerak

to'qima madaniyati tajribalari tuproq kislotaligi tabiiy

o'rganilayotgan o'simliklarning o'sishi.

Izolyatsiya qilingan o'simlik to'qimalari yorug'lik ostida o'stiriladi

onaning talablarini hisobga olgan holda lyuminestsent lampalar

o'simliklar 1000-5000 lyuks va 14-16 soatlik fotoperiodda etishtiriladi,

bunday yorug'lik sharoitlari shakllanishning boshlanishiga yordam beradi

ko'pchilik o'simliklarning kurtaklari va ildizlari. Biroq, ko'p

tadqiqotlar intensivlikning muhim rolini ko'rsatadi

organogenez induksiyasida yorug'lik. Shunday qilib, yorug'likning oshishi

3000 dan 6000 lyuksgacha intensiv kurtaklar shakllanishiga yordam beradi

begonia madaniyati. Kurtaklar va ildizlarning maksimal shakllanishi

qushqo'nmas to'qimalarining madaniyati 1000 lyuks, pasayish yoki qayd etilgan

yorug'likning oshishi to'qimalarning organogenezini inhibe qiladi.

Izolyatsiya qilingan to'qimalarning o'sishining intensivligi va tabiati ham bog'liq

yorug'likning spektral tarkibi. Shunday qilib, oq, qizil va ko'k chiroq tugadi

dan Heloniopsis orientalisda kurtak shakllanishini intensiv ravishda induktsiya qiladi

yashil. Qizil yorug'lik gul kurtaklari shakllanishini rag'batlantiradi

tamaki to'qimasi va qorong'ulik - ildizlarning shakllanishi. Individual buyraklar

tamaki kallusi ultrabinafsha, ko'k va tomonidan qo'zg'atiladi

binafsha nur. Salat ekplantlarida qizil yorug'lik sabab bo'ladi

otishma shakllanishi. Probirkali kartoshka o'simliklari uchun bu shunday edi

muhitda NAA yoki IAA mavjudligi sezilarli darajada ekanligini aniqladi

ko'kdan ko'ra qizil rangda tuberizatsiyani kuchliroq rag'batlantiradi

yorug'lik, BAP yoki kinetin esa

faollikka sabab bo'ladi

qizil yorug'lik bilan solishtirganda ko'k yorug'lik ostida tuberizatsiya.

Qayin kurtaklarining ildiz otishiga eng ijobiy ta'sir,

mavjud meristemalarning faollashishi qizil chiroq bilan ta'minlanadi, bilan

unda deyarli 100% mikrokesim ildiz hosil qiladi. Oq bilan

yorug'lik, bu jarayon kamroq faol va ko'k bilan - ildizlar hosil bo'ladi

so'qmoqlarning faqat yarmi, qorong'ida esa - undan ham kamroq.

Qizil nurning IAA ning atrof-muhitga kiritilishi bilan kombinatsiyasi sezilarli darajada

ildiz hosil qilish jarayonini tezlashtiradi va o'sish intensivligini oshiradi

otadi. Moviy yorug'lik to'qimalarda sitokininlar miqdorini oshiradi

o'simliklar va shu bilan kurtaklar shakllanishini rag'batlantiradi.

Harorat o'sishga sezilarli ta'sir ko'rsatadi va

o'simliklarning yangilanishi, metabolizmning faollashishiga hissa qo'shadi

jarayonlar. Ko'pgina o'simlik to'qimalari uchun harorat

Optimal harorat 23-25 ​​0C. Biroq, ular orasida farqlar mavjud

o'simliklarning haroratga bo'lgan talablari. Shunday qilib,

Lilium auratumda lampochkaning shakllanishi eng samarali hisoblanadi

gladiolus to'qimalari, ularning regenerativ qobiliyatini yaxshilaydi. Past

Induktsiya uchun 2 hafta davomida harorat (15-18 0C) kerak

begonia petioles madaniyatida asirlarning shakllanishi. Buyraklar uchun

phalaenopsis peduncles, haroratning turga ta'siri

morfogenez: 28 0C da kurtaklardan vegetativ kurtaklar tiklanadi va

200C da - generativ.

Harorat rejimi asosan o'simliklar turiga bog'liq.

Shunday qilib, masalan, tropik o'simliklar uchun optimal harorat

etishtirish 27 0C ga yaqinlashadi, alp o'tloqlari o'simliklari uchun -

18-20 0S, boshqalar uchun - 25 0S.

Klonal mikroko'paytirish muammolari va istiqbollari

Vegetativni tezlashtirishda in vitro usullarining samaradorligi

naslchilik ushbu usullarning afzalliklari bilan birlashtirilgan

o'simliklarni kasalliklardan himoya qilganda, ularni jozibali amaliy holga keltiring

ishlatiladigan an'anaviy texnologiyalarga muqobil

ko'plab o'simliklarning ko'payishi. Bir marta asosiy qism

infektsiyadan tozalangan material madaniyatga o'tkaziladi, u emas

erga ekishdan oldin kasalliklarga duchor bo'lgan. Texnologiyani qo'llash

mikropropagatsiya olingan mahsulot narxini kamaytirishi mumkin

ko'p miqdorda sog'lom ekish materiallari. Uchun

Ba'zi madaniyatlarda in vitro usuli olishning yagona usuli hisoblanadi

ekish materiali.

Biroq, o'simliklarni ko'paytirish laboratoriyasi

to'qima madaniyati ko'proq sarmoya talab qiladi va shuning uchun

an'anaviyga nisbatan yuqori joriy xarajatlar

ishlab chiqarish. Moliyaviy xarajatlarning katta qismi fond uchun

ish haqi. Bundan tashqari, xodimlar standartlar bo'yicha malakali bo'lishi kerak

mikrobiologiya usullari va ikkalasi bo'yicha etarli bilimga ega

ish olib boriladigan o'simliklar biologiyasi va ularning xatti-harakatlari

vitro. Bu etishtirilgan to'g'ri parvarish qilish uchun zarur

o'simliklar va yaxshi natijalarga erishish. to'g'ri

mehnatni tashkil etish barcha mehnat talab qiladigan operatsiyalarni qisqartirish imkonini beradi

minimal, lekin shunga qaramay, yakuniy mahsulot, uning uchun

foyda qimmatga tushadi.

Bu har qanday o'simlik, qulay ostida ko'rinadi

sharoitlar va tegishli reagentlar mavjudligi yetishtirilishi mumkin

in vitro, lekin hozir bu usul bilan samarali ko'paytirilmoqda

faqat oz sonli o'simlik turlari. Hozirgacha ko'p

iqtisodiy jihatdan qimmatli turlarni chaqirish qiyin yoki imkonsizdir

regeneratsiya yoki ildiz shakllanishi. O'simliklarni etishtirishda

tuzilmasini, hayot aylanishini va hisobga olgan holda tizimli yondashuvni qo'llash

o'simlik biokimyosi, garchi usullar asosan qolmoqda

empirik. Asosiy ekinlar, ko'paytirish vaqti va xarajatlari uchun

in vitro to'lash mumkin, lekin eng bezak uchun va

boshqa o'simliklarda bunday ko'payish texnologiyasi oddiygina bo'lishi mumkin emas

soddalashtirilgunga qadar iqtisodiy jihatdan samarali.

Klonal mikroko'paytirishning texnik qiyinchiliklari. IN

etishtirish vaqtida ko'plab o'simliklar ortiqcha hosil qiladi

fenolik moddalar miqdori, ularning oksidlanish mahsulotlari nafaqat

to'qima va madaniy muhitning qorayishiga olib keladi, balki bostiradi

balandligi. Agar bu asl eksplantning reaktsiyasiga bog'liq bo'lsa, unda bo'lishi mumkin

askorbin yoki limon kislotasi bilan davolash orqali oldini olish.

Mikroklonlarning o'sishi va yangilanishi qo'shilishi bilan yaxshilanadi

rag'batlantiradigan faol ko'mirning madaniy muhiti

inhibitiv moddalarni olib tashlash. Afsuski faollashtirilgan.

ko'mir ham gormonlar va boshqa moddalarni bog'laydi, bu esa hududni toraytiradi

uning in vitro ishlatilishi.

Ba'zan o'simliklar o'stirilganda shishib,

qaytarib bo'lmaydigan darajada shaffof bo'ladigan o'ralgan barglar va

nekrotik, bu asirlarning o'limiga olib kelishi mumkin. Bunday hodisa

"suvni yutish" deb ataladi va "vitrifikatsiya" deb ta'riflanadi,

o'z ichiga olgan muhitda o'stirilgan ko'chatlarda uchraydi

sitokininlar. Vitrifikatsiyani kamaytirish orqali oldini olish mumkin

gormonlar kontsentratsiyasi. Shuning uchun, grechka chiziqlarini klonlash uchun,

vitrifikatsiyaga moyil bo'lgan holda, muhitni almashtirishdan foydalaning

sitokininlar va gormonsiz muhit (3-5 o'tishdan keyin). tomonidan

Ba'zi tadqiqotchilarning fikriga ko'ra, vitrifikatsiyaning asosiy sababi

atrof-muhitning yuqori suv salohiyati. Tez-tez kamaytirish uchun

muhitda agar kontsentratsiyasini oshirish va bog'liq

ko'paytirish omilining kamayishi kiritish orqali qoplanadi

o'rta bir vaqtning o'zida uchta sitokinin - kinetin, BAP va zeatin.

Kevers gipotezasiga ko'ra, vitrifikatsiya stressga javobdir

tarkibida ammoniy ionlari, sitokininlar va etilenning paydo bo'lishiga olib keladi

madaniy muhitda ortiqcha. Ushbu muallifga ko'ra, vitrifikatsiya

idishlarda gaz almashinuvini yaxshilash va foydalanish orqali engish mumkin

ammoniy ionlari va sitokininlar.

Biologik tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, u

shishalangan barglar

pasayish

PAL faoliyati

(fenilalanin ammiak liazasi) va kislota peroksidazalari, ortadi

kamayishiga olib keladigan asosiy peroksidazalarning faolligi

lignifikatsiya. Xilma-xillik bilan bog'liq bo'lgan xilma-xillik gipotezalari

ob'ektlar, sabablarni tushunishda hali ham aniqlik kamligini ko'rsatadi

vitrifikatsiya, shuning uchun u bilan kurashish usullari empirikdir

xarakter.

Laboratoriyalarda takroriy qiyinchiliklar,

in vitro usullaridan foydalangan holda, kulturalarni asta-sekin yuqtirishdan iborat

o'sayotgan va ko'pincha ko'zga ko'rinmas bakteriyalar. Ular bo'lmasligi mumkin

asirlarning rivojlanishiga aniq ta'sir ko'rsatadi, ammo

o'simlikning hayotiyligi va keyinchalik ildiz shakllanishi

tez-tez tushkunlikka tushadi. Aksariyat mikroorganizmlar saprofitlardir

manba materialini sterilizatsiya qilgandan keyin saqlanadi. Bunday

ifloslanishni faqat toza ishlatish bilan kamaytirish mumkin

ortiqcha namliksiz o'sadigan manba materiali. jiddiyroq

muammo o'simlik to'qimalarida yashovchi bakteriyalar,

chunki ularni an'anaviy sterilizatsiya usullari bilan olib tashlash qiyin.

Ba'zilarining sanoatda yetishtirilgan to'qimalarining ifloslanishi

manzarali o'simliklar Ervinia carotova, ko'p patogen sabab bo'ladi

bog 'o'simliklari. Ushbu bakteriyalarning to'qimalar madaniyatida mavjudligi

o'simliklarning hayotiyligi va xlorozining pasayishiga olib keladi;

an'anaviy sanoat ishlab chiqarishida qayta tiklangan mahsulotlar

bu patogenlarga sezgir emas. Qo'shimcha choralar

ehtiyot choralari o'simlik qismlaridan eksplantlarni izolyatsiya qilishni o'z ichiga oladi;

patogenlardan xoli (apikal meristema). Jarayonda

donor o'simlikni yaxshilash uchun etishtirish qo'llaniladi

yuqori va past harorat, antibiotiklar. Va hatto bu holatda ham

aniqlash uchun ishonchli test usullaridan foydalanish muhim ahamiyatga ega

mumkin bo'lgan infektsiya.

In vitro ko'paytiriladigan o'simliklarning sifati

Ko'pincha, to'qima madaniyati usullari bilan ko'paytiriladigan o'simliklar yo'q

har doim asl onalik shakllariga o'xshash. Bo'lishi mumkin

ikki toifaga bo'lingan bir qator sabablarga ko'ra yuzaga keladi:

1) rivojlanishdagi qisqa muddatli o'zgarishlar, deb ataladi

epigenetik ta'sir;

2) genetik yoki natijasida kelib chiqadigan genetik o'zgarishlar

xromosoma mutatsiyalari.

Epigenetik o'zgarishlar sharoitlar ta'siriga bog'liq

o'simliklarda etishtirish va in vitro olingan regenerantlar mumkin

erga tushgandan keyin ularni engib o'ting. Bu o'simliklar xarakterlidir

shakli tartibsiz bo'lgan oz sonli birinchi barglar va

erta susayadi. Agar o'simliklar o'stirilsa, bu muhim ahamiyatga ega

to'g'ridan-to'g'ri sotish uchun, masalan, paporotnik yoki

bargli o'simliklar. O'rta va transplantatsiya vaqtini ehtiyotkorlik bilan tanlash

kompost bu salbiy ko'rinishlardan qochadi.

Zarar

ko'proq sabab bo'lishi mumkin

uzoq muddatli morfologik anomaliyalar, ular:

masalan, ko'paygan dallanish yoki qayta joylashtirish

barglari. Shunday qilib, davomida qulupnay mikroklonal ko'paytirish

Erga tushganidan keyin 2 yil o'tgach, rozetkalar sonining ko'payishi va

barglarning o'zaro joylashishidagi buzilishlar, natijada

o'simliklar o'sgan va og'ir shoxlangan ko'rinardi. Pultda

cho'qqisida ko'plab o'sish nuqtalari topilgan, chiziqli joylashtirilgan

yoki tasodifiy aylana bo'ylab. Bu hodisa kuchayib bordi

BAP konsentratsiyasi, lekin GK3 tomonidan bostirildi. Mualliflar kelishdi

foydalanish orqali ushbu qoidabuzarliklarning oldini olish mumkinligi haqidagi xulosa

gormonlarning tegishli kontsentratsiyasi va ayni paytda ushlab turish

nisbatan yuqori ko'payish sur'atlari.

genetik o'zgarishlar. Spontan mutatsiyalar muqarrar

barcha madaniy o'simliklarni ishlab chiqarish jarayonida yuzaga keladi. Da

Oddiy ko'payish, qaysi o'simlikni aniqlash oson

mutatsiya. Barglarning shakli, rangi kabi belgilarning o'zgarishi

mikroklonlardagi gul yoki meva sifati faqat aniqlanishi mumkin

o'simlik erga ekilgan va o'stirilgandan keyin. Shunung uchun

in vitro sodir bo'lgan spontan mutatsiyalar ko'pincha qoladi

sezilmagan. Madaniy yuksalish jarayonida oldingi

ommaviy mutatsiya sodir bo'lsa, mutant tarkibi shunchalik yuqori bo'ladi

otadi.

sonini ko'paytirish orqali mikroko'payish kamayadi

manba materiali, ya'ni. dastlabki bosqichda zarur
iloji boricha ko'proq otish uchun maslahatlar yoki eksplantlardan foydalaning. Da

sifatida qayta foydalanishni ham oldini olish yaxshiroqdir

In vitroda olingan surgun eksplantlari (ular tarkibida

mutatsiyaga uchragan material).

Eksperimental tajriba shuni ko'rsatadiki, genetik jihatdan

uyushgan meristemalar barqaror, qo'ltiq osti kurtaklari esa

sezilarli genetik qarshilik. Ma'lumki, aksiller

lateral yuzalarda meristematik to'qimalar paydo bo'ladi

novda cho'qqisiga ega bo'lib, bir nechta diskret to'qimalar qatlamini o'z ichiga oladi

tunikalar va korpuslar. Mutatsiya - bu sodir bo'ladigan hodisa

bitta hujayrada. Spontan yoki induktsiyani o'z ichiga olgan hujayra

mutatsiya, bo'linishi mumkin, to'qimalarning faqat cheklangan maydonini tashkil qiladi.

bir qatlam ichida, bu ximeraning shakllanishiga olib keladi, qaysi

odatda beqaror bo'ladi va tez o'ladi. Shunday qilib,

qo'ltiq osti meristemalaridan qayta tiklangan o'simliklardir

genetik jihatdan barqaror.

Adventitsiyali kurtaklar turli meristemalardan paydo bo'ladi (bundan tashqari

apikal va aksiller), shuningdek, qayta differensiyalash orqali

somatik hujayralar. Aksillar aksessuaridan farqli o'laroq

meristematik to'qimalar mutagenezga moyil bo'ladi, chunki

odatda bitta hujayradan yoki kichik guruhdan kelib chiqadi

hujayralar. Shunday qilib, selektsioner to'liq olishi mumkin

mutant kurtaklar (ximeralar emas) mutagen bilan davolash orqali ancha osonlashadi

ba'zi bir organning yangilangan to'qimalari yoki hatto hisoblash

spontan mutatsiya. Shuning uchun ehtiyot bo'lish kerak

qo'shimchalarni o'z ichiga olgan har qanday in vitro tizimiga murojaat qiling

meristematik to'qimalar va o'simliklarni ko'paytirish uchun ishlatiladi.

Totipotent hujayralardagi mutatsiyalar ko'payishi mumkin

ozuqa moddalarining mumkin bo'lgan mutagen ta'siri natijasida

NAA, BAP, 2,4-D kabi ommaviy axborot vositalari, ammo ishonchli dalillar mavjud

bu moddalarning bevosita mutagen ta'siri olinmagan. O'zgaruvchanlik

somatik hujayralardan in vitroda qayta tiklangan o'simliklar orasida,

juda sezilarli. Hozirgacha uning paydo bo'lishining ichki mexanizmlari

aniqlanmagan, ammo to'qimalarda genetik o'zgarishlar aniq

tez-tez uchraydi, lekin faqat regeneratsiyadan keyin paydo bo'ladi. Da

an'anaviy so'qmoqlar, tabiiy regeneratsiyadan kelib chiqadi

odatda polisomatik bo'lmagan to'qimalar (poliploid)
masalan, epidermisdan yoki floemaning ma'lum joylaridan

parenxima.

Kallusda, agar u qat'iy ravishda maxsus olingan bo'lsa ham

polisomatik bo'lmagan (poliploid bo'lmagan) eksplant, odatda boshlanadi

soni ortib borayotgan poliploid va rivojlanadi

aneuploid hujayralar, ayniqsa 2,4-D yoki NAA dan foydalanganda.

Poliploidiya o'simlik turlarining 90% da uchraydi. O'xshab ko'ring

xromosoma mutatsiyalari va ayrim genlarning mutatsiyalari. IN

kallus madaniyati sezilarli somaklonal ko'rsatishi mumkin

o'zgarishlar, natijada o'simliklar sezilarli darajada yangilanadi

morfologiyasi, o'sish tezligi, sezgirligi bilan farqlanadi

gormonlar. dan regeneratsiya haqida ko'plab xabarlarga qaramay

diploid o'simliklarning kallusi, ko'p hollarda

poliploid va aneuploid regenerantlarning paydo bo'lishi. Ta'riflangan

gen mutatsiyasi holatlari: xrizantema kallus madaniyatidan o'simliklarda

gullarning rangi o'zgartirildi, shakarda foydali mutantlar aniqlandi

qamish va boshqalar.

Shunday qilib, hozirgi vaqtda, genetik jihatdan ta'minlash maqsadida

ichida afzal ko'paytirish usuli bilan bir hil ko'chatlar

vitro - qo'ltiq osti kurtaklari bilan ko'paytirish. Laboratoriyalar,

mikroko'paytirishda ishtirok etadi, agar iloji bo'lsa, foydalaning

bu usul va shuning uchun ko'p qiyinchiliksiz erishiladi

genetik jihatdan bir hil ekish materiali.

Ayrim turlar uchun mikroklonlarni usul bilan olish mumkin edi

aksillar asirlarini faollashtirish va kallusdan o'simliklarni qayta tiklash.

Birinchi usul yordamida ko'paytiriladigan qushqo'nmas o'simliklar yo'q

o'simliklar qayta tiklanganda, genetik kasalliklarga ega edi

kallusdan 70% gacha poliploidlar mavjud. 1500 ga yaqin

chinnigullar aksillar kurtaklar nish bilan ko'paytiriladi, mutantlar yo'q edi va qachon

kallus yordamida o'simliklar o'zgartirilgan bilan shakllangan

gul rangi.

Kutilmagan kurtaklar bilan ko'paytirish qo'llaniladi

aksillar kurtaklari kamdan-kam hosil bo'lgan o'simliklarga. Buning uchun

Usul eksplant va konsentratsiyalarni diqqat bilan tanlashni talab qiladi

atrof-muhitdagi gormonlar. Ba'zi turlar osongina g'ayritabiiy shakllanadi

o'simliklar, masalan, o'simliklar orasida em-xashak karamida,

to'g'ridan-to'g'ri barg va poya eksplantlaridan qayta tiklangan;

tetraploidlarning 70% dan ortig'i va oktaploidlarning 15% dan ortig'i topilgan. Shunga

qaramasdan,

to'qimalarning bir qatlamidan barcha qo'shimcha kurtaklar hosil bo'lmaydi

alohida hujayra. Ko'p bulbous o'simliklar qo'shimcha bor

hech bo'lmaganda tarozi yoki barglar tagida meristema hosil bo'ladi

kamida 2 ta hujayra qatlamidan, bu olish ehtimolini oshiradi

normal tiklanadi.

Yog'ochli o'simliklarni in vitro ko'paytirish

Tropiklardan tortib to o'sadigan daraxt turlarining keng doirasi

shimoliy kengliklari, katta iqtisodiy ahamiyatga ega. Odatda

bu madaniyatlarning xususiyatlarini yaxshilash jarayoni juda

asta-sekin. Bu daraxtlarning hayot aylanishining uzunligi bilan bog'liq:

qarag'ay o'rmonlarining aylanmasi 20-25 yil, sanoat aylanmasi

olma daraxtlari va boshqa mevali daraxtlar - 20 yil va undan ko'p, plantatsiyalar

yog'li palma - bundan ham ko'proq.

Muayyan xususiyatlarga ko'ra tanlangan etuk daraxtlar,

vegetativ yoʻl bilan koʻpayadi. Bu ko'pincha mashaqqatli jarayon

vaqt talab qiluvchi va ba'zi hollarda, masalan, uchun

monokot palmalar, umumiy vegetativ ko'payish

imkonsiz.

Yog'ochli o'simliklarning to'qimalar madaniyati bo'yicha birinchi ishlar

XX asrning 20-yillari o'rtalarida nashr etilgan va nomi bilan bog'liq

Fransuz olimi Gautr. Ular qobiliyat haqida xabar berishdi

qarag'ay va qarag'ayning ayrim turlarining kambial to'qimalari kallusogenezgacha

in vitro. 40-yillarning keyingi asarlarida qobiliyat haqida ma'lum bo'ldi

qarag'ay bargining turli to'qimalari qo'shimcha kurtaklarning shakllanishiga.

Biroq, asirlarning keyingi o'sishi va shakllanishi mualliflar tomonidan hisobga olinmagan.

qabul qildi. Faqat 1960-yillarning o'rtalarida Mates qo'lga kiritishga muvaffaq bo'ldi

ga olib kelingan birinchi aspen regenerativ o'simliklari

tuproq madaniyati. In vitroda ignabargli to'qimalarni etishtirish

uzoq vaqt davomida tadqiqot mavzusi bo'lib kelgan. bilan bog'liq edi

voyaga etmaganlarni etishtirishda muayyan qiyinchiliklar va

o'simlikdan ajratilgan kattalar to'qimalari ustida. Ma'lumki

yog'ochli va ayniqsa ignabargli, sekin o'sishi bilan ajralib turadi,

ildiz otish qiyin, ko'p sonli ikkilamchi mavjud

izolyatsiya qilingan to'qimalarda turli xil oksidlangan birikmalar

fenolazalar. O'z navbatida, odatda fenollarning oksidlanish mahsulotlari

hujayra bo'linishi va o'sishini inhibe qiladi, bu esa birlamchining o'limiga olib keladi

Eksplantatsiya qilish yoki daraxt turlarining to'qimalarining qobiliyatini kamaytirish

qo'shimcha buyraklarni qayta tiklash. Donor o'simlikning qobiliyati

qo'shimcha buyraklar shakllanishi asta-sekin yosh bilan yo'qoladi

to'liq. Biroq, barcha qiyinchiliklarga qaramay, olimlar tobora ortib bormoqda

tadqiqot ob'ekti sifatida turli to'qimalardan foydalanish va

yog'ochli o'simliklarning organlari. Hozirda dan ortiq

40 oilaga mansub 200 turdagi yog'ochli o'simliklar ko'payadi

vitro (kashtan, qayin, chinor, aspen, qarag'ay, archa, sekvoya va boshqalar), ishlash

bu borada mamlakatimizda ilmiy muassasalarda olib borilmoqda

Moskva, Sankt-Peterburg, Voronej, Ufa, Novosibirsk.

Arxangelsk va boshqalar.

Daraxtlarni in vitro ko'paytirish usullari madaniyatni o'z ichiga oladi

aksillar yoki qo'shimcha kurtaklar nish ko'paytirish bilan surgun, shuningdek

kurtaklar yoki embrioidlarni qayta tiklash bilan kallus madaniyati.

Yog'ochlilarning vegetativ ko'payishi uchun alohida ahamiyatga ega

poprod, ham an'anaviy usullar bilan, ham in vitro sharoitida, bor

voyaga etmagan shakllari. Ko'chat shakllanishidan keyin o'simlikning o'sish bosqichi

voyaga etmagan deb ataladi. Bu ko'pincha faol o'sish bosqichidir

ma'lum morfologik xususiyatlar bilan tavsiflanadi;

barglarning maxsus shakli, tikanlar mavjudligi va qila olmaslik kabi

gul shakllanishi. Ushbu bosqichda vegetativ ko'payish odatda sodir bo'ladi

osonlik bilan amalga oshirilishi mumkin. Voyaga etmaganlar davlati bir necha bor davom etmoqda

yillar. Oxir-oqibat, daraxt shakllanish qobiliyatiga ega bo'ladi

gullar, mevalar va urug'lar va kattalar bosqichiga kiradi;

vegetativlik qobiliyatining pasayishi bilan tavsiflanadi

ko'payish. Biroq, balog'atga etmaganlik bosqichidan o'tish ko'rinadi

qaytuvchan va kattalar daraxtining ba'zi to'qimalari aniq

ko'chatlarga xos fiziologik xususiyatlar,

masalan, tasodifiy ildizlarni shakllantirishning yuqori qobiliyati.

Bunday to'qimalar yoshartirilgan deb ta'riflanadi.

Yetuk daraxtlardan olingan eksplant uchun bu muhim ahamiyatga ega

asl to'qimalarning fiziologik holatiga ega. Ilmiy sohada

Frantsiyadagi Wood-pulp assotsiatsiyasining tadqiqot instituti

kattalar o'rmon daraxti eksplantlari in vitro o'sishini ko'rsatdi

yoshartirilmagan to'qimalardan olingan bo'lsa, sekin yoki umuman o'smaydi.

Yangilangan to'qimalar tabiiy ravishda paydo bo'lishi mumkin,

masalan, odatda "tops" deb ataladigan kuchli kurtaklar,

to'g'ridan-to'g'ri ildizlardan yoki adneksal kurtaklardan o'sadi.

Yoshartirish

turli ta'sirlar sabab bo'lishi mumkin:

ko'chatlarga asirlarni payvand qilish, novdalarni kesish, parvarish qilish

o'g'itlarning yuqori konsentratsiyasi, vegetativ ko'payish yoki

sitokininlar bilan purkash.

Hozirgi vaqtda yoshartirish (yoshartirish) amalga oshirilmoqda

bir necha usulda:

1) o'sayotgan daraxt yoki shaxsni takroriy qayta ishlash

eksplantni izolyatsiya qilishdan oldin sitokinin eritmasi bilan filiallar;

2) takroriy so'qmoqlar;

3) kurtaklar o'sishini qo'zg'atish uchun daraxtlarni tez-tez kesish

to'g'ridan-to'g'ri daraxt tanasidan yoki shakllanishni rag'batlantirish uchun

ildiz so'rg'ichlari;

4) takroriy emlashlarni o'tkazish;

5) in vitro subkulturalar seriyasi bilan;

6) lateral ta'minlovchi zich plantatsiyalarni yaratish

uxlab yotgan kurtaklarning rivojlanishini rag'batlantirishi mumkin bo'lgan soyalash.

To'qimalarni yoshartirish uchun siz sitokininlar bilan birgalikda qilishingiz mumkin

boshqa o'sish regulyatorlaridan foydalaning. Masalan, ba'zi turlarda

BAP bilan qo'llanganda kuchaygan reaktsiya mavjud

Kichik konsentratsiyada N-dimetilaminosuksin kislotasi.

Butun o'sayotgan daraxt yoki uning alohida shoxlari in vivo jonli davolanadi.

Kesilgan novdalar sitokinin yoki sitokinin eritmasiga botiriladi

to'g'ridan-to'g'ri daraxtning qon tomir tizimiga, masalan, orqali AOK qilinadi

in'ektsiya yo'li bilan kesilgan shoxning oxiri. Qayta ishlash bilan amalga oshiriladi

4-5 kunlik interval, chunki gormonlarga tez-tez ta'sir qilish

o'simliklarning zaharlanishiga olib kelishi mumkin. O'sish regulyatorlari induktsiya qiladi

morfologiyaga ega bo'lgan kurtaklar yoki kurtaklar shakllanishi;

yosh shaxslarning morfologiyasiga o'xshash. Keyin surgun yoki qisqa

kurtaklari bo'lgan ildiz segmentlari ozuqa muhitiga joylashtiriladi

kurtak va kurtaklar o'sishini induktsiya qilish uchun vitro. Keyinchalik

hosil bo'lgan kurtaklar ko'payish muhitiga o'tkaziladi,

yoki ildiz otish vositasida. Oraliq bosqichda ular joylashtiriladi

yangi hosil bo'lgan kurtaklarning ochilishi uchun qulay muhitga va

ularni qochishga aylantirish.

kabi iqtisodiy qimmatli daraxtlarni etishtirishda

mevali, shuningdek zarur

izolyatsiya qilish

eksplantlar

dan

yangilangan to'qimalar. Shunday qilib, olma daraxtlari uchun - ko'pincha

boshlang'ich eksplantlar orqali yosh ko'chatlar asirlari olingan bo'lsa

kurtaklar uzilishidan keyingi oy. U saqlash usullaridan foydalanadi

sovuqda o'simliklar, yil davomida material bilan ta'minlash

rivojlanishning ushbu bosqichi.

Aksillar otish madaniyati odatda eksplantdan boshlanadi

otishma uchlari yoki aksillar kurtaklari. Adventsion otishni o'rganish madaniyati

shuningdek, bunday eksplantlardan, shuningdek, parchalardan boshlangan

internodalar, barglar, kotiledonlar, subkotiledozli tizzalar va embrionlar.

Urug'lar yoki ko'chatlardan olingan eksplantlar (balog'atga etmagan material)

odatda in vitro etishtirish uchun eng mos keladi. Kattalar uchun

Eksplant qilish sharti bilan daraxtlarning tez ko'payishiga erishiladi

havo kurtaklaridan (olma, olxo'ri, olcha ildizlari) olinadi.

Yoshartirilgan tabiiy eksplantlardan foydalanish

to'qimalarning yo'li ba'zi o'rmon angiospermlari uchun istiqbolli

daraxtlar, shuningdek, gimnospermlar.

dan olingan gimnospermlarning in vitro kurtaklari ildiz otish

ko'chatlar va urug'larning eksplantlari odatda ancha murakkablashadi,

angiospermlarga qaraganda, faqat bir oz dalolat beradi

muvaffaqiyatli urinishlar soni. Gimnospermlar uchun yana bir muammo

Ildizli kurtaklarning ba'zilari plagiotropik (ostida o'sadi).

tortishish va yorug'lik yo'nalishiga ma'lum bir burchak) va

shuning uchun o'rmon ekish uchun mos emas. Kirish qiyinligi tufayli

madaniyat, ildiz otish va plagiotropik ko'rinish turlari soni

ko'payishi mumkin bo'lgan gimnospermlar

Hozirgi vaqtda massa miqdori cheklangan. yoshartirish

etishtirish jarayonida kattalar o'simliklarining to'qimalari ortadi.

In vitro yoshartirish haqidagi ma'lumotlarning aksariyati olma daraxti uchun olingan.

Shunday qilib, Norten olma navi uchun, birinchi 4 ta asirlarning ko'payish tezligi

ketma-ket transplantatsiya oylari 4 barobar oshdi.

Bundan tashqari, asirlarning ildiz hosil qilish qobiliyati ham

bir necha transplantatsiyadan keyin ortdi.

Ozuqa muhitida floroglyuksinning mavjudligi 2-3 ga sabab bo'ldi

asirlarning o'sishi va ildiz otishining ko'p marta ko'payishi. floroglyusin -

olma daraxtining asosiy fenolik birikmasi florizinning parchalanish mahsuloti;

uning harakati, shubhasiz, metabolizm orqali amalga oshiriladi

aoksinlar. Tadqiqotlar fenolik ta'sirini ko'rsatdi

aralashmalar faqat etishtirishning dastlabki 3 oyi davomida qoldi, qachon

o'sish va ildiz hosil qilish qobiliyati past edi.

Guruch. 10. Sibir qoraqarag'ali ekspantasi, tasodifiy kurtaklari bilan.

A B C

Guruch. 11. Olingan tasodifiy kurtaklardan asirlarning rivojlanishi

kun), 2 - Sibir lichinkasi (180 kun), 3 - shotland (180 kun)

kun).

Floroglyuksinning asirlarga ta'siri haqida boshqa ma'lumotlar mavjud.

ildiz shakllanishi va o'sishi, shuningdek sezilarli darajada oshdi

tuproqqa ko'chirilganda o'simliklarning omon qolishi va ko'proq darajada

dan ko'ra kattalar o'simliklardan olingan asirlari madaniyati darajasi

ko'chatlar. Ko'chat madaniyatlari kerak emas ko'rinadi

fenolik birikmalar. Shubhasiz, floroglyuksinning ta'siri bog'liq

to'qimalarning xilma-xilligi va fiziologik holati bo'yicha. Shunday qilib,

floroglyuksinning ta'sirini tezlashtiruvchi omil sifatida ko'rish mumkin

in vitro yoshartirish jarayoni.

Daraxtlarni kallus madaniyati orqali ko'paytirishda

o't o'simliklarini ko'paytirishda bo'lgani kabi bir xil yondashuvlar qo'llaniladi

o'simliklar. Boshlang'ichning fiziologik holati

eksplantlar. Urug'lardan va ko'chatlardan olingan Calli bor

farqlash uchun eng katta qobiliyat. Ildizlar, kurtaklar,

embrioidlar va regenerantlar aynan shunday kallusdan hosil bo'lsa-da

juda cheklangan miqdordagi gimnospermlar va angiospermlar uchun.

Biroq, bu kallus tizimlari tezkorlik uchun unchalik samarali emas

daraxtlarni ko'paytirish (ayniqsa, kalli kattalardan olingan bo'lsa

daraxtlarni yoshartirilgan to'qimalar orqali) mos ravishda

otishni o'rganish madaniyati tizimlari. Istisno - bu bir nechta turlar

orqali yuqori chastotada ko'payadigan kofe daraxti

barg eksplantlaridan kalluslarda hosil bo'lgan embrioidlar.

Yadro to'qimasini juda yoshartirilgan deb ko'rish mumkin

kattalar daraxtining to'qimalari, tsitrus mevalarida esa embrioidlarning shakllanishi

bunday to'qimalardan olingan kallus haqiqiy yaratishga olib keladi

klonlar.

moyli palmani madaniyat usuli bilan vegetativ ko'paytirish

to'qimalar in vitro nuqtai nazaridan alohida e'tiborga loyiqdir

iqtisodiy qiymati. Gvineya moyining jahon ishlab chiqarishi

yog'li palma (meva pulpasidan olinadi va ketadi

ovqat yog'i va margarin pishirish) va karam palma yog'i

(meva chuqurlaridan olinadi va ishlab chiqarish uchun ishlatiladi

sovun, yuvish vositalari va kosmetika) 1980-1981 yillarda. 4,9 million tonnaga yetdi va yilda

2005 yilda dunyoda palma yog'i ishlab chiqarish taxminan 47 million tonnani tashkil etdi.

Yog'li xurmo yog'li o'simliklar orasida ikkinchi o'rinni egalladi.

soyadan keyin ikkinchi.

Gvineya yog'li palma madaniyati keng tarqalgan

1960-1980 yillarda tarqatish 1980 yilda ushbu turdagi plantatsiyalar

Afrikaning nam tropiklarida bir necha million gektar maydonni egallagan,

Amerika va Janubi-Sharqiy Osiyo. Yog 'xurmo yuz va yashaydi

yillar o'tib, daraxt yetib borishi bilanoq unumsiz bo'lib qoladi

mevani erdan asbob bilan yetib bo'lmaydigan balandlik;

tutqich bilan ta'minlangan. Kultivatsiyada moy palmalari boshlanadi

hayotning beshinchi yilida, umuman, operatsion davrda meva beradi

unib chiqqandan keyin 20-25 yil davom etadi. Shunday qilib, plantatsiyalar kerak

har 25-28 yilda yangilanadi, bu esa millionlab ko'chatlarni talab qiladi.

Boshqa tomondan, bitta o'simlikka ega bo'lgan yog'li palma

erkak va urgʻochi gullar, oʻzaro changlanadi

da yuqori darajada o'zgaruvchanlikni ta'minlaydigan o'simliklar

naslning shakllanishi. O'tish shakllarini tanlash imkonini berdi

yuqori neft mahsuldorligi. 4 t beradigan o'simliklar olindi

an'anaviy o'simliklar uchun yiliga 1 tonnaga nisbatan yiliga 1 gektardan neft.

O'simliklarni kesib o'tish orqali yaxshilashdan beri

ko'p vaqt talab qiladi va kamida 10 yil talab qiladi;

tadqiqot harakatlari vegetativ klonlashga qaratilgan

yuqori mahsuldor o'simliklar. Biroq, yog 'xurmosi hosil bo'lmaydi

tabiiy sharoitda surgun va yon kurtaklar, shunday qilib

ko'paytirish maqsadida uning poyasidan mayda kurtaklardan foydalanish

istisno qilingan. Olimlar in vitro to'qima madaniyatiga murojaat qilishlari kerak edi. IN

yog'li palma ko'paytirish bo'yicha tajribalar mikrokesish

meristema yetishtirish natijasida imkonsiz bo'lib chiqdi

rad etishga majbur bo‘ldi. Ingliz va frantsuz tadqiqotchilari qaror qildilar

holda daraxtning tepasidan eng yosh barglardan kalli oling

apikal buyrak meristemasining shikastlanishi.

Birinchi madaniy muhitda kalli 90 yildan ortiq rivojlangan

kunlar. 2 va 3-transplantatsiyada embrioidlar paydo bo'la boshladi. IN

bir oy ichida embrionlar soni 3 barobar ko'paydi

yiliga taxminan 10 ta embrioiddan nasl olish mumkin edi

500 000 dan ortiq o'simliklar. Mualliflar embrioidogenez ko'proq ekanligini ta'kidladilar

keyingi emas, balki dastlabki eksplantning tabiatiga bog'liq

etishtirish sharoitlari. Beshinchi madaniy vosita berdi

embrioidlarning barglari bilan ko'chatlarga aylanish imkoniyati, 6 va

7-induktsiyalangan ildiz o'sishi. O'simlikning embrioid bosqichidan rivojlanishi

12 sm balandlikdagi ko'chatlar bosqichiga 3 oy ichida sodir bo'ldi.

Tajriba stantsiyasida (Kot-d'Ivuar Respublikasi) usuli

da koʻchat olish uchun klonlash qoʻllanila boshlandi

1981 yildan beri sanoat miqyosi Yuqori narx

klonlangan material qo'shimcha sabab bo'ladi

investitsiyalar umumiy qiymatining 7-12% ni tashkil qiladi

ko'chatlar yordamida plantatsiyalar. Biroq, bunday bilan

tomonidan ko'payish usuli, neft qazib olishning ortishi mavjud

Yiliga 20-30%, bu sizning sarmoyangizni tezroq qaytarish imkonini beradi

ob'ektlar.

Ko‘chatlar, pishiq xurmolar ham ko‘paytirildi

kalluslardan olingan embrionlar yordamida. Ishlatilgan

usullari ko'payish uchun ishlatiladiganlarga o'xshash edi

gvineya yog'i palmasi.

Daraxtlardagi genetik anomaliyalar haqida ma'lumot,

in vitro ko'paytirish cheklangan, chunki ularning aksariyati

daraxtlar rivojlanishning laboratoriya bosqichida qolmoqda. Haqida

uyushgan otishma meristemalari, ular genetik jihatdan ko'rinadi

barqaror. Shunday qilib, sitrus yadrosidan kallus deyarli iborat edi

butunlay kichik meristematik hujayralardan va o'simliklardan -

regenerantlar genetik jihatdan bir xil edi. Bundan tashqari, bu kallus

moslashtirilgan va yuqori konsentratsiyalar mavjudligini talab qilmagan

ozuqaviy muhitda o'sish regulyatorlari, bu ham hissa qo'shishi mumkin

genetik barqarorlik. Gvineya palma kalluslari ham,

o'simliklar kabi genetik jihatdan barqaror bo'lgan ko'rinadi

embrioidlardan qayta tiklanganlar bir xil edi. Juda past

in vitro ko'paytiriladigan daraxtlarning o'zgaruvchanligi shuni ko'rsatadi

genetik anomaliyalar, hech bo'lmaganda, asosiy muammo emas

kamida ba'zi turlar uchun.

Daraxtlarning klonal mikroko'payishi hisoblanadi

faqat yangi navlarni tez ko'paytirish uchun foydali va ularda

ota-ona materialining miqdori bo'lgan holatlar

cheklangan. Biroq, bu sohadagi muvaffaqiyat tufayli egalari

bolalar bog'chalari mumkin bo'lgan moliyaviy manfaatlarga tobora ko'proq qiziqish bildirmoqda

daraxtlarni ko'paytirish uchun in vitro usullaridan foydalanish.

Mevali daraxtlarni ko'paytirishning an'anaviy usuli - payvandlash.

ildizpoya uchun navli novda. Hozirda sanoatda

Yevropa, Kanada va AQSH laboratoriyalari meva ildizlarini ishlab chiqaradi

aksillar otish madaniyatidan foydalangan holda daraxtlar. Bunday daraxtlar

yuqori sifatli xususiyatlarga ega. Eng katta tajriba

in vitro usullari bilan ildizpoyalarni olish Italiyada to'plangan va

ularning aksariyati shaftoli daraxtlarining ildizpoyalari hisoblanadi

ishlab chiqarish hajmlari. Tuproqqa regenerantlarning o'tkazilishi hisoblanadi

Korxonalar barcha mahsulot tannarxining 40-80 foizini oladi

etarli daromad va moliyaviy jiddiy

mikroklon transplantatsiyasi samaradorligini oshirish bo'yicha tadqiqotlar

tuproq, shuningdek, mevali daraxtlarning payvandlangan navlarini ko'paytirish.

Meva ekinlarini in vitroda sanoat ko'paytirishdan tashqari, bu

usul tez bilan naslchilik dasturlarida ham qo'llaniladi

dala sinovlari uchun yangi istiqbolli liniyalarni ishlab chiqarish.

Ildiz poyalariga navli o'simtani payvand qilish uzoq davom etadi (yo'q

3 yildan kam) va yuqori talab qilinadigan qimmat jarayon

bolalar bog'chasi ishchilarining malakasi. Shu sababli, ko'payish

daraxtlarning o'z-o'zidan ildiz otishi tezroq

muhim iqtisodiy afzalliklarga ega bo'lgan usul,

ayniqsa, juda zich ekilgan zamonaviy bog'lar uchun

mevali daraxtlar. Biroq, ko'pchilik greft navlarida

so'qmoqlarni ildiz otish qiyin jarayon va faqat nisbatan yaqinda

ularning ba'zilari lignli so'qmoqlar bilan ko'paytirishga muvaffaq bo'ldi

qattiq nazorat ostidagi shartlar. Oddiy sharoitlarda, ba'zilari

olma daraxtlari navlari bitta asosiy kurtaklar va kichik kurtaklar hosil qiladi

yon kurtaklar soni, in vitro esa ular aksillar hosil qiladi

kuchliroq navlar kabi tez o'sib chiqadi.

Hozirgi vaqtda olma daraxtlarining ko'plab payvand navlari tezdir

butun dunyo bo'ylab turli laboratoriyalarda in vitro ko'paytiriladi. Rivojlanish

bunday o'simliklar oddiy daraxtlar bilan bir xil tezlikda ketadi.

Shunday qilib, yoshartirish davom etmoqda

klonal

gullash, agar o'simliklarning hammasi bo'lsa, kutilishi mumkin edi

ko'chat xususiyatlari. Qabul qilingan o'z-o'zidan ildiz otgan daraxtlar,

an'anaviy ravishda ko'paytiriladigan daraxtlar sifatida foydalanish mumkin,

ildizpoyalarga payvand qilish uchun.

An'anaviy ravishda o'rmon daraxtlari urug'lar bilan ko'paytiriladi. ko'payish

in vitro asosan unumdorlikni oshirish uchun zarur

bir necha urug' qo'yadigan daraxtlar. Eng muhim hudud

ilovalar elita kattalarni ommaviy ishlab chiqarishni ko'rib chiqadi

o'simliklar, bu esa hosildorlikning sezilarli o'sishiga olib keladi

o'rmonlar. Misol uchun, Frantsiyada in vitro usuli yordamida bolalar bog'chalari va o'rmonlarda

allaqachon tanlangan kattalardan 20 000 dan ortiq turdagi daraxtlarni olgan

gimnospermlar va ulardan foydalanish

baland yoshartirilgan daraxtlarning ko'chatlarini yotqizish uchun daraxtlar

keyingi o'rmonzorlar bilan sifatli.

12-rasm. Aspenni in vitro ko'paytirish: 1 - aspenni mikrokesish

in vitro; 2 - mikroo'simliklarning ildiz otishi; 3 - mikroo'simliklarning moslashuvi

aspens.

bundan tashqari, ular bakteriyalar bilan tizimli infektsiyaga moyil va

qo'ziqorinlar. Qayta tiklangan daraxtlarni cheklangan miqdorda olish mumkin

apikal meristema madaniyati va issiqlik bilan ishlov berish orqali miqdorlar.

In vitro ko'paytirish - bu tez kattalashtirish uchun ideal usul

bunday materialning miqdori. Hozirda Angliyada boshlangan

virussiz ildizpoyalarni in vitroda sanoatda ko‘paytirish.

O'simliklar odatda yadro kallusidan tiklanadi

viruslardan xoli, chunki patogenlar kamdan-kam hollarda urug'lar orqali uzatiladi.

Bu usul tsitrus mevalaridan viruslarni olib tashlash uchun ishlatilgan.

Keyingi yillarda bu borada sezilarli yutuqlarga erishildi.

taraqqiyot va allaqachon etuk daraxtlarni in vitro ko'paytirish

muhim amaliy foyda keltiradi; kelajakda vegetativ

in vitro ko'paytirishda bebaho yordam bo'ladi

daraxt ko'paytirish.

Shunday qilib, otish madaniyati usullari tashqarida

eng keng turdagi daraxt turlarini ko'paytirish uchun raqobat

daraxtlar. Biroq, takomillashtirish uchun keng imkoniyatlar mavjud

sanoat ishlab chiqarish nuqtai nazaridan bu usullar, shuningdek

hali yetishtirilmagan ob'ektlarga nisbatan.

Ba'zi o'simliklar ko'payish uchun yaratilganga o'xshaydi

vitro, yo yoshartirishga olib keladigan usullarni qo'llash orqali yoki

mavjud etishtirish usullarini o'zgartirish orqali, masalan,

madaniyatning noorganik va gormonal tarkibiy qismlarini o'zgartirish orqali

atrof-muhit Biroq, asirlarini etishtirish usullari ancha xom va

vaqt talab qiluvchi va asirlarni doimiy ravishda ajratish, ildiz otish va talab qiladi

tuproqqa kiritish. Kallus yoki hujayra suspenziyasidan embrioidogenez

ko'proq istiqbolli ko'rinadi

Uchun

tez vegetativ

xurmo hosil bo'lgan ekish materiali borligini ko'rsatadi

genetik barqarorlik.

Yangi naslchilikda in vitro ko'paytirishdan foydalanish

daraxt turlari juda muhim bo'lishi mumkin, chunki

an'anaviy

ko'payish

normal jinsiy gibridizatsiya

juda mashaqqatli va ko'p yillar davom etadi. Bundan tashqari, bor

steril bo'lgan ko'plab iqtisodiy jihatdan qimmatli zotlar, ular uchun

xususiyatlarni yaxshilashni an'anaviy usullar bilan olish mumkin emas

tanlash. Yaqin kelajakda bulardan ba'zilari

transgenlarni olish orqali cheklovchi omillar bartaraf etiladi;

genetik jihatdan kallus yoki bitta hujayradan mutantlar va poliploidlar

beqaror yoki ilgari mutagen

harakat. Kelajakda usullardan foydalanish mumkin

polen va protoplastlarni etishtirish, bu ham imkon beradi

daraxt tanlash imkoniyatlarini kengaytirish.

Shunday qilib, klonal mikroko'paytirish yangilikdir

o'simliklarni vegetativ ko'paytirishning istiqbolli usuli,

genetik jihatdan bir hil, sog'lom olish imkonini beradi

ekish materiali, yuqori ko'payish omiliga ega,

tanlash jarayoni vaqtini qisqartirish, doirasida ishlarni amalga oshirish

uchun zarur bo'lgan joyni tejash bilan birga butun yil davomida

o'sayotgan o'simliklar. Dunyoning ko'p joylarida biosanoat

klonal mikropropagatsiya ishlab chiqarish liniyasiga qo'yiladi

sanoat asosidagi va o'nlab faollar bilan ifodalanadi

faoliyat ko'rsatayotgan korxonalar. Masalan, Frantsiyada hammasining 94 foizi

gul ekinlari mahsulotlari madaniyat usuli bilan olinadi

izolyatsiya qilingan matolar. AQShda 100 ga yaqin tijorat korxonalari mavjud

manzarali, sabzavot, meva va ekish uchun material oling

o'rmon ekinlarini klonal mikroko'paytirish. Etakchi

reabilitatsiya qilingan gul ekish materiali ishlab chiqaruvchisi

ekinlari Gollandiya, olma, olxo'ri va shaftolining ildizpoyalari -

Italiya. Bu borada mamlakatimizda ham jadal ishlar olib borilmoqda

o'simliklarning klonal mikroko'paytirish va hozirgi vaqtda ko'p

ilmiy-tadqiqot institutlari va sanoat laboratoriyalari

in vitro va ko'payish usullarini ishlab chiqish va takomillashtirish

turli dekorativ, meva, rezavorlar, sabzavotlarni yaxshilash,

em-xashak va daraxt ekinlari. Masalan, tezlashtirilgan usullar

uzumni ko'paytirish, Vinochilik institutida ishlab chiqilgan va

uzumchilik "Magarach", sizga bir kesish 8000 olish imkonini beradi

4 oy davomida o'simliklar. dan malina ko'chatlarini yaxshilash

Termoterapiya va kombinatsiyasi orqali virusli kasalliklar majmuasi

apikal meristem madaniyati hosildorlikni oshiradi

sanoat madaniyati 6-8 baravarga oshgan. Ko'paytirish va olish

chinnigullar, xrizantemalar, atirgullarning virussiz ekish materiali,

begonias ruslarning "Elita" gulchilik fermalarida etishtiriladi

Federatsiya. Qozonda ekishni yaxshilash va ko'paytirish

kartoshka materiali TatNIISXoz va savdoda amalga oshiriladi

"Alchak" firmasi.

Mustaqil ish uchun savollar

1. "O'simliklarni klonal mikroko'paytirish" nima.

2. O'simliklarni klonal mikroko'paytirishning afzalliklari

an'anaviy naslchilik usullari bilan solishtirganda.

3. O'simliklarni klonal mikroko'paytirishni qo'llash sohalari.

4. Usul birinchi marta qachon va qaysi ekinlar uchun ishlab chiqilgan

o'simliklarning klonal mikroko'payishi.

5. Klonal mikroko'paytirish turlari.

6. Mavjudni faollashtirish usuli bilan o'simliklarni ko'paytirish

meristema o'simligi.

7. O'simliklarni mikrokesish va mikrotuberlar bilan ko'paytirish.

8. O'simliklarning paydo bo'lish induksiyasi bilan ko'payishi

tasodifiy qochishlar.

9. Keyingi induksiya bilan kallus to'qimasini olish

organogenez yoki embrioidogenez. Ushbu usulning kamchiliklari

klonal mikroko'paytirish.

10. Madaniylarning irsiy o'zgaruvchanligiga nima sabab bo'ladi

o'simlik hujayralari?

11. Viruslardan ekish materialini yaxshilash yo'llari.

12. O'simliklarning klonal mikroko'paytirishning asosiy bosqichlari.

13. Eksplantni izolyatsiya qilish va sterilizatsiya qilish.

14. Turli bosqichlardagi ozuqa muhitining kimyoviy tarkibi

o'simliklarning klonal mikroko'payishi.

15. Mikroklonlarni akklimatlashtirish.

16. Klonal mikroko'paytirishga irsiy omillarning ta'siri

o'simliklar.

17. O'simliklarning ko'payishiga qanday fizik omillar ta'sir qiladi

in vitro.

18. O'simliklarning mikroko'payishida fitohormonlarning ahamiyati.

19. O'simliklarni mikroko'paytirish uchun zarur shart-sharoitlar.

20. Klonal mikroko'paytirishning texnik qiyinchiliklari.

21. Vitrifikatsiya va uning sabablari.

22. In vitro olingan o'simliklarning epigenetik o'zgaruvchanligi.

23. Mikroklonlarning genetik o'zgaruvchanligi.

24. Daraxtlarni in vitro sharoitda ko‘paytirishning o‘ziga xos xususiyatlari.

25. Yog'ochsimon o'simlik to'qimalarini yoshartirish va uning klonaldagi roli

daraxt turlarini mikroko'paytirish.

26. Daraxtlarni klonal mikroko'paytirish usullari.

27. Yog 'xurmosini in vitroda ko'paytirish.

28. O'rmonda klonal ko'payishdan foydalanish istiqbollari

biotexnologiya.

Adabiyotlar ro'yxati

1. Babikova A.V., Gorpenchenko T.Yu., Zhuravlev Yu.N. o'simlik kabi

biotexnologiya ob'ekti // Komarov o'qishlari. - 2007. - Nashr. Lv. -

184-211-betlar.

2. Barabin A.I. Genetika: darslik. nafaqa - Arxangelsk: Severny

(Arktika) Federal universiteti, 2010. - 116 p.

3. Batygina T.B., Vasil'eva V.E. O'simliklarning ko'payishi. - Sankt-Peterburg: nashriyot uyi

Sankt-Peterburgda. un-ta, 2002. - 232 b.

4. Butenko R.G. Yuqori o'simlik hujayralari biologiyasi in vitro va

ularga asoslangan biotexnologiyalar - M.: FBK-PRESS, 1999. - 160 b.

5. Madaniy hujayralar biologiyasi va o'simliklar biotexnologiyasi /

Butenko R.G. [va boshqalar]; ed. R.G. Butenko. – M.: Nauka, 1991. – 278 b.

6. O'simlik hujayralari madaniyati va biotexnologiyasi / Butenko R.G. [va boshqalar];

ed. R.G. Butenko. – M.: Nauka, 1986. – 286 b.

7. Vysotskiy V.A. Tizimdagi biotexnologik usullar

mevaning yaxshilangan ekish materialini ishlab chiqarish va

berry ekinlari: dissertatsiya tezis. dis. ... Doktor S.-x. Fanlar. - M., 1998. -

44 b.

8. Ditchenko T.I., Spiridovich E.V., Jeldakova R.A. Hujayra madaniyati,

107 b.

biotexnologiya. - M .: "Akademiya", 2003. - 208 b.

10. Zagoskina I.V., Nazarenko L.V., Kalashnikova E.A., Jivuxina E.A.

Biotexnologiya: nazariya va amaliyot. O'quv qo'llanma. - M .: Ed. oniks,

2009.- 496 b.

11. Kalinin F.L., Kushnir G.P., Sarnatskaya V.V. Texnologiya

o'simliklarning mikroko'payishi. - Kiev: Ilmiy fikr,

1992. - 232 b.

12. Kalinin F.L., Sarnatskaya V.V., Polishchuk V.E. Madaniyat usullari

o'simliklar fiziologiyasi va biokimyosida to'qimalar. - Kiev: Ilmiy fikr,

1980. - 488 b.

13. Kartel N.A., Kilchevskiy A.V. Biotexnologiyada

o'simlikchilik. - Minsk: Texnologiya, 2005. - 310 p.

14. Kataeva N.V., Butenko R.G. Klonal mikroko'paytirish

o'simliklar. – M.: Nauka, 1983. – 96 b.

15. Kvesitadze G.I., Bezborodov A.M. Biotexnologiyaga kirish. - M:

Nauka, 2002. - 283 b.

16. Kuzmina N.A. Biotexnologiya asoslari: [Elektron resurs].

2005-2010. URL: http://www.biotechnolog.ru. (Ariza berilgan sana:

08.08.2012).

17. Lutova L. A. Oliy o'simliklar biotexnologiyasi. - Sankt-Peterburg: nashriyot uyi S.-

Peterburg. un-ta, 2010. - 240 b.

18. Molkanova O.I., Zinina Yu.M., Makedonskaya N.V., Brel N.G.,

Fomenko T.I., Spiridovich E.V. Biotexnologiyaning rivojlanishi

Oddiy lilakni ko'paytirish usullari // Fiziologiya va

madaniy o'simliklar biokimyosi. - 2010. - T. 42, No 2. - B. 117-124.

19. Novikova T.I., Nabieva A.Yu., Poluboyarova T.V. Saqlash

Markaziy in vitro kollektsiyasida noyob va foydali o'simliklar

Sibir botanika bog'i // Vestnik VOGiS. - 2008. - 12-jild,

No 4. - S. 564-572.

20. Orlova I.G. Madaniy ko'paytirishning asosiy yo'llari va

yovvoyi flora. - Stavropol: SGU nashriyoti, 2003. - 142 p.

21. Pershina L.A. Izolyatsiya qilingan hujayralar va to'qimalarni etishtirish

yuqori o'simliklar. - Novosibirsk: NGU, 2000. - 46 p.

22. Rodin A.R., Kalashnikova E.A. Hujayradan foydalanish va

ekish materialini olish uchun genetik muhandislik

daraxt turlari. – M.: MGUL, 1993. – 90 b.

23. Filippova I.P. ichida tasodifiy kurtak shakllanishi va kallusogenez

In vitro madaniyatida Sibir ignabargli turlari. Abstrakt dis. ... to-ta

biol. Fanlar. - Krasnoyarsk, 2010. - 23 p.

24. Xayrullin R.M., Kuramshina Z.M. O'simliklar biotexnologiyasi. -

Sterlitamak: Sterlitamak davlat pedagogika

Akademiya, 2008. - 39 b.

25. Cherevchenko T.M., Lavrent'eva A.N., Ivannikov R.V. Biotexnologiya

in vitro tropik va subtropik o'simliklar - Kiev: Naukova

Dumka, 2008. - 559 b.

26. Sheveluxa V.S., Kalashnikova E.A., Voronin E.S. va boshq.

Qishloq xo'jaligi biotexnologiyasi - M.: Vyssh. maktab, 2008 yil.

710 s.

27. Shestibratov K.A., Lebedev V.G., Miroshnikov A.I. Lesnaya

Biotexnologiya. - 2008. - No 5. - B. 3–22.

28. Shestibratov K.A., Miroshnikov A.I. O'rmon biotexnologiyasi:

hozirgi holati va rivojlanish istiqbollari: [Elektron

manba]. URL: http://www.biorosinfo.ru/Vcongress/Shestibratov.pdf.

(Kirishgan: 08.08.2012).

MUNDARIJA

Klonal mikroko'paytirish

3

Klonal mikroko'paytirish turlari

Virussiz ekish materialini olish

19

O'simlik to'qimalarini o'stirish bosqichlari va texnikasi

22

Ta'sir qiluvchi omillar

mikroko'paytirish

28

Klonal mikroko'paytirish muammolari va istiqbollari

In vitro ko'paytiriladigan o'simliklarning sifati

39

Yog'ochli o'simliklarni in vitro ko'paytirish

Mustaqil ish uchun savollar

Adabiyotlar ro'yxati