126
O’simliklar to’qimasidan STAB usulida genom DNK sini ajratish
Kerakli reagentlar:
Suyuq azot
2xCTAB
10xCTAB
Xloroform : izoamil (24:1)
CTAB Precipitation
High Salt RNKazali (50ml/200mkl)
Izopropanol
70% spirt
TE bufferi
Kerakli asbob-uskunalar:
Xovoncha yoki probirka (1500/2000
mkl) va stikchalar
Pastavka (96 talik)
Sentrifuga
Muzlatgich
65
0
C Avtoblot va Vorteks
Konsentrator
Rezina qo’lqop konchiklar (100, 200 va
1000 mkl)
1. Barg
suyuq azotda muzlatilib gomogenizatsiya qilinadi.
2. 600 mkl
2xCTAB solinadi va 60
0
C
AUTOBLOTga 20 minutga qo’yiladi (har 5 minutda
aralashtiriladi).
3. Ustiga 600 mkl
Xloroform : izoamil (24:1) solinib, 2 minut qattiq aralashtiriladi.
4. 5 minut/10 000 oborotda
sentrifuga qilinadi va supernatantning yuqorisidan 600 mkl
boshqa probirkaga olinadi.
5. Ustiga 60 mkl
10xCTAB solinib aralashtiriladi.
6. Ustiga 600 mkl
Xloroform : izoamil (24:1) solinib, 2 minut qattiq aralashtiriladi.
7. 5 minut/10 000 oborotda
sentrifuga qilinadi va supernatantning yuqorisidan 600 mkl
boshqa probirkaga olinadi.
8. Ustiga 1:1
nisbatda CTAB Precipitation solionadi va 60
0
C
AUTOBLOTga 30 minutga
presipitatsiyaga qo’yiladi.
9. 3 minut/14 000 oborotda
sentrifuga qilinadi va supernatant to’kiladi.
10. Cho’kma ustiga 300 mkl
High Salt solinadi va 5 minut
vorteks qilinib so’ng 15 minut xona
haroratida saqlanadi.
11. Ustiga 250 mkl
Izopropanol solinadi va 2 minut sekin aralashtiriladi.
12. 15 minut/10 000 oborotda
sentrifuga qilinadi va supernatant to’kiladi.
13. Cho’kma ustiga 600 mkl
70% li spitr solinib 5 minut aralashtiriladi.
14. 3 minut/14 000 oborotda
sentrifuga qilinadi va spirt to’kiladi. (Cho’kma
spirt bilan ikki
marta yuviladi).
15. Cho’kma yani DNK
konsentratorda quritiladi 10-15 minut
16. Cho’kma ustiga 100 mkl
TE bufferi solinib
vorteks qilinadi va short
sentrifuga va -20
0
C
