Рисунок 5.
Линейно-логарифмическое выражение зависимости длины тела и
массы
Capoetobrama kuschakewitschi
Gobio sibiricus
— еще один вид, подвергнутый молекулярно-
генетическому анализу. До сих пор ученые считали, что в бассейнах реки
Узбекистана встречается только один вид рода
Gobio
–
G. lepidolaemus
(Мусави-Сабет, Х. и др., 2016). Однако в проведенных нами ихтиологических
исследованиях было установлено, что помимо
G. lepidolaemus
, относящегося
к роду
Gobio
, в водоемах Узбекистана встречаются еще два вида, такие как
G.
nigrescens
и
G. sibiricus
.
В июле 2019 г. при проведении ихтиологических исследований в
низовьях Каратaгдарьи в бассейне Сурхандарьи (около территории махалли
Акастана) нами были обнаружены две особи рыбы
Gobio
(рис. 6). Для
молекулярно-генетического анализа ткань правого грудного плавника рыбы
вырезали и хранили при -20°С в 96% спирте. Пробы рыб фиксировали в 10%
растворе формальдегида для измерения их морфометрических показателей.
Каждый полученный экземпляр хранится в коллекции Лаборатории
разведения и развития пресноводных рыб Юго-Западного университета (SWU)
под номерами SWU23072019373 и SWU02082019531.
Рисунок 6.
Gobio sibiricus
, SWU23072019373, 56 мм TL Каратaг Дарье
y = 0.0055x
3.1075
R²
= 0.9601
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
18.00
20.00
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Ма
сс
а
тела
рыбы, гр.
Длина тела рыбы, см.
37
Экстракцию ДНК проводили стандартным фенол-хлороформным
методом с использованием растворимой протеиназы К из грудных плавников
(Sambrook J., Russell D.W., (2001)). Для ПЦР-амплификации гена
митохондриальной цитохромоксидазы I (COI) Ivanova et al. (2007)
использовали предложенные праймеры VF2_t1 TGT AAA ACG ACG GCC
AGT CAA CCA ACC ACA AAG ACA TTG GCA C и FR1d_t1 CAG GAA ACA
GCT ATG ACA CCT CAG GGT GTC CGA ARA AYC ARA A. Продукты ПЦР
состояли из 10 нг образца ДНК, по 1
μl
каждого праймера, 12,5
μl
Taq Master
Mix (Новопротеин, Гуандун, Китай) и ddH2O, всего 25
μl
. Последовательность
термоциклических процессов в ПЦР была следующей: первые 3 мин. 94°С;
после этого 20 секунд, всего 35 циклов. 94°С, 45 сек. 54°С и 1 мин. 10 сек. 72°C
и финальный процесс 7 мин. 72°С продолжалось.
Секвенирование проводили в прямом и обратном направлениях с
использованием праймеров VF2_t1 и FR1d_t1. Последовательности COI
других видов
Gobio
были получены из NCBI GenBank. В качестве внешней
группы использовался
G. conocephalus
. Затем были рассчитаны генетические
расстояния (K2P) и построено дерево максимального правдоподобия (ML) с
1000 бутстреп-репликациями с использованием MEGA 7 для изучения
филогенетического сходства (Kumar, S. et al., (2016)). Анализ байесовского
вывода (BI) проводился с использованием MrBayes 3.2 (Ronquist, F. et al.,
(2012)).
Филогенетическое дерево молекулярного анализа показало
G. nigrescens
из реки Зарафшан (инвентарные номера GenBank: MN810111, MN810112)
G.
nigrescens
из реки Хари в Иране (расстояние K2P 0,54%) и
G. sibiricus
из
бассейна рек Сурхандарьи (GenBank) инвентарный номер: MN810110) из реки
Обь (Россия), обнаружена во взаимной кладе с
G. sibiricus
(расстояние K2P
0,51%) из реки Иртыш и озера Балхаш (Казахстан).
G. sibiricus
и
G. lepidolaemus
(уникальные номера GenBank: MN810113,
MN810114), распространенные во внутренних водоемах Узбекистана, очень
близки друг к другу и отличаются расстоянием K2P 0,72%. Генетические
различия между последовательностями COI
G. nigrescens
и
G. sibiricus
по
сравнению с последовательностями COI
G. lepidolaemus
составили 6,34% и
7,01% соответственно.
Результаты исследований, проведенных на представителях рода
Gobio
,
показали, что
G. sibiricus
и
G. nigrescens
обитают на рек Обь и Енисее. Помимо
встречи в реках Нура и Хари, он впервые отмечен также в бассейне Амударьи.
Наши молекулярно-филогенетические исследования также подтвердили
утверждение о том, что
G. nigrescens
не близок к
G. gobio
.Рис. 7.
|
