|
Mavzu: Operatsion kuchaytirgichlar asosida analog signallar o’zgartirgichlari. Reja
|
| bet | 2/5 | | Sana | 17.07.2024 | | Hajmi | 406,96 Kb. | | #267758 |
Bog'liq elektronika2.Amplifikatsiya.
Amplifikatsiya (lotincha amplification - kuchaytirish, ko'paytirish), molekulyar biologiyada, odatda, ma'lum genlar yoki strukturaviy geteroxromatin segmentlarini o'z ichiga olgan xromosoma DNK bo'limlarining qo'shimcha nusxalarini shakllantirish jarayonidir. Amplifikatsiya selektiv ta'sirga (masalan, metotreksat ta'siri ostida) hujayraning javobi bo'lishi mumkin. Amplifikatsiya o'simta rivojlanishida onkogenlarni faollashtirish mexanizmlaridan biridir, masalan, neyroblastoma rivojlanishida N-mik onkogen. Shuningdek, kuchaytirish - bu PCR - polimeraza zanjiri reaktsiyasi paytida ma'lum bir nukleotid ketma-ketligining nusxalarini to'plashdir.
Ikki marta ko'paytirish jarayoni:
Izolyatsiya qilingan DNK molekulasi isitiladi, keyin u ikki ipga bo'linadi. Primerlar qo'shiladi. Keyin DNK va primer aralashmasi sovutiladi. Bunday holda, primerlar, agar kerakli gen DNK aralashmasida mavjud bo'lsa, uning komplementar hududlari bilan bog'lanadi. Keyinchalik, DNK polimeraza va nukleotidlar DNK va primer aralashmasiga qo'shiladi. DNK polimerazasining ishlashi uchun optimal haroratni o'rnating (37 ° C). Bunday sharoitda gen va primer o'rtasida DNK komplementarligi bo'lsa, nukleotidlar primerlarning 3' uchiga qo'shiladi, natijada genning ikki nusxasi sintezlanadi. Shundan so'ng, tsikl yana takrorlanadi, gendagi DNK miqdori har safar ikki barobar ortadi. Reaktsiya maxsus qurilmalarda amalga oshiriladi - kuchaytirgichlar. Primerlar
PCR ning o'ziga xosligi shablon va primerlar o'rtasida bir-birini to'ldiruvchi komplekslarning shakllanishiga asoslanadi, 18-30 asos uzunlikdagi qisqa sintetik oligonükleotidlar. Primerlarning har biri ikki ipli shablonning iplaridan biriga qo'shimcha bo'lib, kuchaytirilgan hududning boshi va oxirini cheklaydi.
Shablonni astar bilan gibridlashtirgandan so'ng (tavlanish), ikkinchisi qo'shimcha shablon zanjiri sintezi paytida DNK polimeraza uchun primer bo'lib xizmat qiladi (pastga qarang ).
Primerlarning eng muhim xarakteristikasi primer-matritsa kompleksining erish harorati (Tm) dir.
Tm - DNK shablonlarining yarmi oligonukleotid primeri bilan kompleks hosil qiladigan harorat. K + va DMSO ionlarining kontsentratsiyasini hisobga olgan holda qisqa oligonukleotid (va uzun DNK fragmentlari uchun) uchun T m ni hisoblashning o'rtacha formulasi:
Agar primerning uzunligi va nukleotid tarkibi yoki tavlanish harorati noto'g'ri tanlangan bo'lsa, shablon DNKning boshqa hududlari bilan qisman to'ldiruvchi komplekslarning shakllanishi mumkin, bu esa o'ziga xos bo'lmagan mahsulotlarning paydo bo'lishiga olib kelishi mumkin. Erish haroratining yuqori chegarasi polimeraza ta'sirining optimal harorati bilan cheklanadi, uning faolligi 80 ° C dan yuqori haroratlarda kamayadi.
Astarlarni tanlashda quyidagi mezonlarga rioya qilish tavsiya etiladi:
GC tarkibi ~ 40-60%;
T m primerlarni yoping (5 ° S dan ortiq bo'lmagan farqlar);
o'ziga xos bo'lmagan ikkilamchi tuzilmalarning yo'qligi - soch turmagi va dimerlar;
3' uchida guanin yoki sitozin bo'lishi maqsadga muvofiqdir, chunki ular shablon molekulasi bilan uchta vodorod aloqasini hosil qiladi, bu esa duragaylashni yanada barqaror qiladi.
|
| |
