Gidroliz
Gidroliz oqsil namunasini 6 M da qizdirish orqali amalga
oshiriladi xlorid kislota 24 soat yoki undan ko'proq vaqt davomida 100-110 °
S gacha. Ko'p miqdordagi oqsillar hidrofob guruhlar uzoqroq isitish davrlarini
talab qilishi mumkin. Ammo, bu holatlar shunchalik kuchliki, ba'zi
aminokislotalar (serin, treonin, tirozin, triptofan, glutaminva sistein)
tanazzulga uchragan. Biokimyo Onlayn ushbu muammoni chetlab o'tish uchun
har xil vaqt uchun alohida namunalarni isitishni, har bir olingan eritmani tahlil
qilishni va gidrolizning nolga teng vaqtiga ekstrapolyatsiyani taklif qiladi.
Rastall degradatsiyani oldini olish yoki kamaytirish uchun turli xil reagentlarni
taklif qiladi, masalan tiol reaktivlar yoki fenol triptofan va tirozinni xlor va
oksidlanishdan oldin sistein ta'siridan himoya qilish.
27
II BOB Protein barqarorligi sensorlarining tuzilishi va mexanizmi: kichik
issiqlik zarbasi oqsillarining chaperon faolligi
2.1. Peptid bo'laklariga hazm qilish. Folding sekvensori
Aminokislotalarni
ajratish
mumkin
ion
almashinadigan
xromatografiya keyin ularni aniqlashni osonlashtirish uchun derivatsiya
qilingan. Odatda, aminokislotalar hosil bo'ladi, so'ngra eritiladi teskari faza
HPLC.
Ion almashinadigan xromatografiyaning namunasi MTRK tomonidan
sulfatlangan polistirolni matritsa sifatida ishlatib, aminokislotalarni kislota
eritmasiga
qo'shib
va
doimiy
ravishda
ortib
boruvchi
buferdan
o'tkaziladi. pH ustun orqali. Aminokislotalar pH mos keladigan darajaga
yetganda elutatsiya qilinadi izoelektrik nuqtalar. Aminokislotalarni ajratib
bo'lgach, ularning ranglarini hosil qiluvchi hosil qiluvchi reaktiv qo'shib
ularning tegishli miqdori aniqlanadi. Agar aminokislotalarning miqdori 10
nmoldan oshsa, ninhidrin buning uchun ishlatilishi mumkin; u prolin bilan
reaksiyaga kirishganda sariq rang, boshqa aminokislotalar bilan esa jonli
binafsha rang beradi. Aminokislota kontsentratsiyasi hosil bo'lgan eritmaning
yutilishiga mutanosibdir. Juda oz miqdorda, soat 22.00 gacha, lyuminestsent
hosilalar, masalan, reagentlar yordamida hosil bo'lishi mumkin orto-ftaldegid
(OPA) yoki floresamin.
Ustundan
oldingi
derivatizatsiya
ultrabinafsha
nurlari
bilan
aniqlanadigan lotin hosil qilish uchun Edman reaktividan foydalanishi
mumkin. Kattaroq sezgirlikka lyuminestsent lotin hosil qiluvchi reaktiv
yordamida erishiladi. Hosil bo'lgan aminokislotalar, odatda C8 yoki C18
yordamida teskari fazali xromatografiyaga uchraydi. kremniy kolonu va
optimallashtirilgan elution gradient. Elitatsiya qiluvchi aminokislotalar
ultrabinafsha yoki lyuminestsentsiya detektori yordamida aniqlanadi va
1 Bogosian G, Violand BN, Dorward-King EJ, Workman WE, Jung PE, Keyn JF (yanvar 1989).
"Escherichia coli tomonidan biosintez va norleusin
28
namunadagi har bir aminokislotani miqdorini aniqlash uchun hosil
bo'lgan standartlar bilan taqqoslaganda eng yuqori joylar.
|
