4-seminar mashg’ulot 4-mavzu: Gen injenerligi metodlarida ishlatiladigan fermentlar Reja: Restriksion endonukleazalar, restriktazalarning klassifikatsiyasi Sun’iy restriktazalar

II tur

• II tur
• II turdagi restriksion endonukleazalar 5 'fosfatlar va 3' gidroksillarni hosil qiladigan ketma-ketlikka yaqin doimiy ravishda aniq DNK ketma-ketliklarini va parchalanishini taniydi. Ular odatda magnezium ionlarini (Mg) talab qiladi2+), ammo ba'zi birlari aniqroq talablarga ega.
• Strukturaviy ravishda ular monomerlar, dimerlar va hatto tetramerlar ko'rinishida bo'lishi mumkin. Rekombinant texnologiyada II tip endonukleazalar qo'llaniladi va shu sababli 3500 dan ortiq fermentlar xarakterlanadi.
• III tur
• Ushbu ferment tizimlari ikkita gendan iborat bo'lib, ular deyiladi mod Y mol go'shti, DNKni taniydigan subbir birliklar va modifikatsiyalari yoki cheklovlari uchun kodlash. Ikkala kichik birlik cheklash uchun zarur, bu jarayon butunlay ATP gidroliziga bog'liq.
• DNK molekulasini yorish uchun ferment palindromik bo'lmagan tanib olish ketma-ketligining ikki nusxasi bilan o'zaro ta'sir qilishi va joylar substratda teskari yo'nalishda bo'lishi kerak. Parchalanishdan oldin DNK translokatsiyasi amalga oshiriladi.

IV tur

• IV tur
• So'nggi paytlarda qo'shimcha guruh aniqlandi. Tizim metilatlangan, gidroksimetillangan yoki gidrometillangan glyukosil kabi faqat o'zgartirilgan DNK sekanslarini yopishtiruvchi oqsillarni kodlovchi ikki yoki undan ortiq genlardan iborat.
• Masalan, EckKMcrBC fermenti RmC umumiy shakldagi ikkita dinukleotidni taniydi; purin, so'ngra metil sitozin, uni bir necha tayanch jufti bilan ajratish mumkin - 40 dan 3000 gacha. Parchalanish ferment tanilgan joydan keyin taxminan 30 baza juft bo'lib o'tadi.

CRISPR-Cas endonukleazalari ko'plab turdagi bakteriyalarning himoya mexanizmiga ta'sir qiluvchi fermentlardir. Bu viruslar, odatda, virus bo'lgan invaziv organizmlardan ma'lum DNK ketma-ketliklarini aniqlaydi va kesadi.

• CRISPR-Cas endonukleazalari ko'plab turdagi bakteriyalarning himoya mexanizmiga ta'sir qiluvchi fermentlardir. Bu viruslar, odatda, virus bo'lgan invaziv organizmlardan ma'lum DNK ketma-ketliklarini aniqlaydi va kesadi.
• Yaqinda Massachusets Texnologiya Instituti (MIT) tadqiqotchilari CRISPR-Cas12bm genomini tahrirlash tizimini inson hujayralarini modifikatsiyasi uchun yuqori aniqlikda kashf etdilar.