|
T rekka qo'llanilishi mumkin bo'lgan DNK miqdori
|
| bet | 7/8 | | Sana | 01.02.2024 | | Hajmi | 1,47 Mb. | | #150003 |
Bog'liq Elektroforez имя прилагательное 1000, Malumotlar bazasi, mustaqil ishimioz, Abdurashid kurs ishi pdf variant, eujem paper, 4-son 1. Tarix, falsafa, 1-Amaliy mashg’ulot. Pythonni o‘rnatish va ishga tushirish. O‘zg, 5 sinf nemis tilidan test, 3e-23 guruh ro\'yxati, HISOBOT MAKTAB, 9au, Эссе на тему, Choynak, № E1 E2 E3 E4 E5 E6 E7 E8 E9 E10 E11 E12 Mark-fayllar.org (1) T rekka qo'llanilishi mumkin bo'lgan DNK miqdori
Pastki chegara ishlatiladigan aniqlash usuli bilan belgilanadi. Agar EtBr bo'yalgan bo'lsa, har 5 mm chiziq uchun <10ng ko'rishni kutmang.
Yuqori chegara: yo'lda juda ko'p DNK ikkita noxush ta'sirga olib keladi:
jeldagi tarmoqli harakatchanligining o'zgarishi (tezroq ketadi). Shunday qilib, masalan, juda ko'p pDNK suyultirilgan original plazmiddan tezroq oqsa, darhol vahima qo'zg'ashning hojati yo'q. (pDNK preparatida juda ko'p RNK ham xuddi shunday ta'sirga olib kelishi mumkin).
DNK miqdorini vizual yoki densitometrik baholash kam baholanishga olib keladi (aniqlik juda past, 5 mm trekka taxminan 0,5 mkg dan boshlanadi). Densitometrik aniqlash uchun optimal diapazon: har bir chiziq uchun 0,02-0,15 mkg.
Bo'yoq mavjudligi:
teshikka kiritishni osonlashtiradi;
fragment jelda qaerda joylashganligi haqida tasavvurga ega bo'lishga imkon beradi;
Ammo ayni paytda:
UV ostida parchalarni kuzatishga xalaqit berishi mumkin;
fragment geldan elutsiya qilinganda kiruvchi ifloslantiruvchi bo'lishi mumkin.
Turli xil agaroz konsentratsiyasi bo'lgan jellarda bo'yoqlarning harakatchanligi:
%
|
Bo'yoqlarning harakatchanligi
|
CC
|
Cresol suyuqligi
|
Bromfen. ko'k
|
OrangeG
|
0,7
|
~10,5 (9-15)
|
~3,8 (3,2-4,5)
|
~0,8 (0,7-1,2)
|
~0,15 (0,1-0,2)
|
0,8
|
~8 (7-9)
|
~2,9 (2,7-3,2)
|
~0,5 (0,4-0,6)
|
<0,25
|
1.0
|
~6 (4,8-7)
|
~2,2 (2-2,5)
|
~0,5 (0,4-0,6)
|
<0,25
|
1.5
|
~2,2 (1,8-2,6)
|
~1,0 (0,9-1,3)
|
~0,25
|
<< 0,25
|
2.0
|
~0,75 (0,6-0,9)
|
~0,35 (0,3-0,4)
|
<0,25
|
<< 0,25
|
Bo'yoq tanlovi:
Bromofenol ko'k va ksilen siyanoli - (H2O dagi 1% lik eritmalar; 1x buferdagi ish konsentratsiyasi ~ 0,005-0,02%) UV ostida parchalarni kuzatishga sezilarli darajada xalaqit berishi mumkin. Bizning tajribamizga ko'ra, ushbu bo'yoqlardan birortasi bilan birga parchani PEGga elutsiya qilish etiketka, bog'lash yoki transformatsiyaga sezilarli ta'sir ko'rsatmaydi.
Cresol qizil (Na tuzi) - (H2O dagi 50 mM eritma eritmasi; 1x buferdagi ish konsentratsiyasi ~ 0,1 mM) fermentativ reaktsiyalarga mos keladi, UV ostida kuzatishga deyarli xalaqit bermaydi.
OrangeG - (formamiddagi 1% eritma; 1x buferdagi ish konsentratsiyasi ~ 0,01-0,05%) eng harakatchan bo'yoq bo'lib, deyarli har doim "ishchi zona" dan tashqarida joylashgan. UV ostida ko'rinadi.
Buferdagi bo'yoq faqat namuna quduqda va jelda osongina ko'rinadigan bo'lishi uchun kerak. Odatda bromofenol ko'k va ksilen siyanoli uchun ~ 0,025% usullarda berilgan (1x buferda), bizning fikrimizcha, juda katta miqdor.
Stolda bo'lish yaxshiroqdir
turli bo'yoqlar bilan tamponlar.
qo'llash uchun buferning turli xil suyultirishlari (10x, 2x, 1x). Bunday holda, har qanday hajmdagi namuna uchtadan (bufer + suv + namuna) emas, balki ikkita komponentdan (bufer + namuna) yig'iladi.
1x, agar namuna hajmi < 25% bo'lsa
2x ==> 25-75%;
10x ==> 75%
|
| |
