Interkalatsiya qiluvchi vositalardan foydalanish

1 2 3 4 5 6

Bog'liq
PCR

2. Interkalatsiya qiluvchi vositalardan foydalanish.

Ushbu aniqlash usuli etidiy bromid va SYBR Green I ning floresansi ikki zanjirli DNK molekulalariga kiritilganda sezilarli darajada oshishiga asoslanadi. Shu tarzda, amplifikatsiyalangan mahsulotlarning to'planishi kuzatilishi mumkin.Shuni ta'kidlash juda muhimki, floresansning oshishi ham ma'lum bir mahsulotning to'planishi, ham o'ziga xos bo'lmagan (primerlar-dimerlar, shmerlar) bilan bog'liq bo'lishi mumkin. To'g'ri natijalarga erishish uchun olingan amplikonlarni qo'shimcha ravishda "eritish egri chizig'i" ni qurish orqali o'rganish kerak.

PCR tugagandan so'ng, reaksiya aralashmasi isitiladi va floresans doimiy ravishda o'lchanadi. Amplifikatsiya mahsulotining erish haroratiga yetganda, floresans keskin kamayadi.Grafikdagi floresansning har bir keskin pasayishi elektroforezda olingan chiziqlar soniga, ya'ni har xil turdagi amplikonlarning soniga to'g'ri keladi.

1. "Nested" PCR (Insted PCR) - hosil bo'lgan qismning bir qismini kuchaytiradigan ikkinchi juft primer mavjud.
2. “Inverted” PCR (teskari PCR) - bir qator fermentativ reaksiyalardan foydalangan holda PCRni o'tkazishdan oldin, xuddi ma'lum bo'lgan qismlar noma'lumning uchlariga yopishtirilgandek, uni amplifikatsiyalash mumkin.
3. Teskari transkripsiyali PCR (Reverse Transscription PCR, RT-PCR) - RNK olinadi (tirik hujayradagi DNK va oqsillar o'rtasida oraliq bosqich bo'lgan molekula) va undan teskari transkriptaza fermenti yordamida DNK olinadi. , bu bilan PCR allaqachon amalga oshiriladi. Bu, masalan, ma'lum bir hujayrada qaysi genlar ifodalanganligini aniqlash uchun qulaydir.
4. Assimetrik PCR (Assimetrik PCR) - agar asosan ikkita DNK zanjiridan birining amplifikatsion mahsulotlari kerak bo'lsa. Teng bo'lmagan miqdorda primerlar qo'shiladi.
5. Real vaqt rejimida miqdoriy PCR - lyuminestsent yorliqli reagentlar qo'llaniladi va maxsus qurilma reaksiya sodir bo'lgan probirkani tekshiradi
6. Uzoq fragmentlarning PCR (Long-range PCR) - uzun (10 mingdan ortiq tayanch juft) fragmentni amplifikatsiyalash uchun ikkita polimerazali PCR qo'llaniladi: ulardan biri, Taq polimeraza, uzun zanjirni sintez qila oladi, ikkinchisi. , 3'5' ekzonukleaza faolligiga ega DNK polimeraza birinchisi tomonidan qilingan xatolarni tuzatishi mumkin.
7. Multipleks PCR - bir nechta juft primerlarni qo’shish va bir vaqtning o'zida bir nechta fragmentlarni kuchaytirish imkonini beradi.

Download 0,49 Mb.

1 2 3 4 5 6

Download 0,49 Mb.