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Am heutigen Kurstag sollen Seren auf die Präsenz von Anti-EBV-VCA-IgG auf die folgende Weise getestet werden
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| bet | 7/23 | | Sana | 02.06.2021 | | Hajmi | 2,1 Mb. | | #14718 |
Am heutigen Kurstag sollen Seren auf die Präsenz von Anti-EBV-VCA-IgG auf die folgende Weise getestet werden:
Von einem Burkitt-Lymphom abstammende permanent wachsende Zellen (P3HR1-Zelllinie) enthalten das EBV-Genom, zwischen 1-10 % dieser Zellen exprimieren virale Strukturproteine, u.a. auch in großen Mengen das sogenannte VCA. Die Zellen wachsen nicht adhärent und können durch einfaches Ausdünnen mit Nährmedium passagiert werden. Die ständig nachwachsenden Zellen, die eine hervorragende Antigenquelle für Antikörper-Nachweise darstellen, wurden zuvor im Viruslabor vorsichtig abzentrifugiert, in isotonischem Puffer resuspendiert und auf Objektträgern mit Feldereinteilung ausgestrichen. Nach Lufttrocknung wurden die Zellen mit Aceton behandelt zur Fixierung und Steigerung der Durchlässigkeit für Antikörper-Moleküle.
Pro Bankreihe gibt es ein mit Feldereinteilung versehenen Objektträger. Entnehmen Sie aus dem beschrifteten Reaktionsgefäß mit der Deckelbeschriftung: EBV, 25 µl des bereits 1:10 verdünnten Probandenserums und bringen diese vorsichtig (ohne die Zellschicht zu zerkratzen) auf ein Feld des Objektträgers. Notieren Sie die Nummer des Objektträgers und die Nummer des Feldes. Wenn alle ein Feld des Objektträgers beschickt haben, wird dieser in einer Plastikbox mit feuchtem Papier verschlossen und bei Raumtemperatur 30 Minuten inkubiert.
- Nach Ablauf der Inkubationszeit werden die Objektträger in Puffer kurz gewaschen, dann wird auf die einzelnen Felder 20 µl einer Konjugat-Lösung gegeben. Diese enthält Ziegen-Antikörper, die gegen menschliches IgG gerichtet sind und außerdem mit einem Fluoreszenzfarbstoff chemisch gekoppelt sind. Ein mit ’’K’’ beschriftetes Reaktionsgefäß steht für je eine Bankreihe zur Verfügung.
- Nach 30 Minuten Inkubation werden die Objektträger für 5-10 Minuten in Puffer gewaschen und getrocknet.
An den folgenden Kurstagen sollen Sie den IFT am Fluoreszenzmikroskop auswerten.
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