11
N- aminokislota terminali tahlili
Sangerning peptid guruhini tahlil qilish usuli:
A derivatizatsiya
N- bilan
terminali tugatish Sanger reaktivi (DNFB),
B dinitrofenil peptidning umumiy
kislota gidrolizi
Qaysi aminokislota hosil bo'lishini
aniqlash N-terminus a peptid zanjir ikki
sababga ko'ra foydalidir: peptid bo'laklari ketma-ketligini butun zanjirga
tartiblashda yordam berish va birinchi tur Edman degradatsiyasi ko'pincha
iflosliklar bilan ifloslangan va shuning uchun aniq aniqlik bermaydi
N-
terminal aminokislota.
Uchun umumlashtirilgan usul N- aminokislota
terminali tahlili quyidagicha:
1.
Peptidni terminal aminokislotani tanlab belgilaydigan reaktiv
bilan reaksiyaga kiriting.
2.
Oqsilni gidroliz qiling.
^ Mixail A. Alterman; Piter Xantsiker (2011 yil 2 -dekabr). Aminokislotalarni tahlil qilish: usullari va
bayonnomalari. Humana Press. ISBN 978-1-61779-444-5.
12
3. Aminokislotani xromatografiya va standartlar bilan taqqoslash
orqali aniqlang.
Terminal aminokislotalarni belgilash uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan
juda ko'p turli xil reagentlar mavjud. Ularning barchasi
omin guruhlari bilan
reaksiyaga kirishadi va shu sababli lizin kabi aminokislotalarning yon
zanjiridagi amin guruhlari bilan ham bog'lanadi - shu sababli to'g'ri joy
tanlanganligini ta'minlash uchun xromatogrammalarni izohlashda ehtiyot
bo'lish zarur. Eng keng tarqalgan
reaktivlardan ikkitasi Sanger reaktivi (1-
ftor-2,4-dinitrobenzol)
va
kabi
dansil
hosilalari dansil
xlorid. Fenilizotiyosiyanat, Edman degradatsiyasi uchun reaktivdan ham
foydalanish mumkin. Xuddi shu savollar aminokislota
tarkibini aniqlashda
bo'lgani kabi amal qiladi, faqat dog 'kerak emas, chunki reaktivlar rangli
hosilalarni hosil qiladi va faqat sifatli tahlil talab qilinadi.
Shunday qilib,
aminokislota faqat standart bilan taqqoslaganda, xromatografiya kolonkasidan
chiqarilishi shart emas. Shuni ham hisobga olish kerakki, har qanday omin
guruhlari markalash reagenti bilan reaksiyaga
kirishganligi sababli, ion
almashinadigan xromatografiyadan foydalanish mumkin emas va yupqa
qatlamli xromatografiya yoki yuqoribosimli suyuqlik xromatografiyasi o'rniga
ishlatilishi kerak.
1.
^ Mixail A. Alterman; Piter Xantsiker (2011 yil 2 -dekabr). Aminokislotalarni tahlil qilish: usullari va
bayonnomalari. Humana Press. ISBN 978-1-61779-444-5.
