1.1. C-terminal aminokislotalarni tahlil qilish. Folding degradatsiyasi Mavjud bo'lgan usullarning soni C-terminali aminokislotalar tahlili
mavjud bo'lgan N-terminalli tahlil usullaridan ancha kichikdir. Eng keng
tarqalgan usul - qo'shish karboksipeptidazalar oqsil eritmasiga, ma'lum vaqt
oralig'ida
namunalar
oling
va
vaqtga
qarab
aminokislotalar
konsentratsiyasining uchastkasini tahlil qilib, terminal aminokislotani
aniqlang. Ushbu usul polipeptidlar va oqsil bloklangan N termini holatida juda
foydali bo'ladi. C-terminal sekvensiyasi DNK sekanslaridan bashorat qilingan
oqsillarning birlamchi tuzilmalarini tekshirishda va ma'lum bo'lgan kodon
sekanslaridan gen mahsulotlarini translyatsiyadan keyingi qayta ishla shini
aniqlashda katta yordam beradi.
Edman degradatsiyasi Asosiy maqola: Edman degradatsiyasi
The Edman degradatsiyasi oqsillarni ketma-ketligi uchun juda muhim
reaktsiya, chunki u oqsilning buyurilgan aminokislota tarkibini topishga imkon
beradi.
Avtomatlashtirilgan
Edman
sekvensionlari
hozirda
keng
qo'llanilmoqda va peptidlarni taxminan 50 ta aminokislotalarga qadar ketma -
ketlik qilishga qodir. Edman degradatsiyasi bilan oqsilni ketma -ketligi uchun
reaktsiya sxemasi quyidagicha; keyinchalik ba'zi qadamlar ishlab chiqi lgan.
1. Har qanday sindirish disulfidli ko'priklar a bilan oqsilda kamaytiruvchi
vosita kabi 2-merkaptoetanol.
A himoya
guruhi kabi yod
sirka
kislotasi aloqalarning qayta shakllanishiga yo'l qo'ymaslik uchun kerak bo'lishi
mumkin.
2. Agar bir nechta bo'lsa, oqsil kompleksining alohida zanjirlarini ajratib oling va
tozalang.
3. Har bir zanjirning aminokislota tarkibini aniqlang.
4. Har bir zanjirning terminal aminokislotalarini aniqlang.
5. Har bir zanjirni 50 ta aminokislota ostida bo'laklarga bo'ling.
6. Parchalarni ajratib oling va tozalang.
7. Har bir fragmentning ketma-ketligini aniqlang.
14
8. Boshqa dekolte naqshini takrorlang.
9. Umumiy oqsilning ketma-ketligini tuzing.
