• Protein sekvensori A oqsil sekvenatori
    		•

    Peptid bo'laklariga hazm qilish




    Download 435.7 Kb.
    Pdf ko'rish
    bet7/13
    Sana01.06.2022
    Hajmi435.7 Kb.
    #22651
    1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   13
    Bog'liq
    Oqsillardagi barqarorlik va aylanish (Folding)(20)
    cae
    Peptid bo'laklariga hazm qilish 
    Taxminan 50-70 aminokislotadan uzunroq bo'lgan peptidlarni Edman 
    degradatsiyasi bilan ishonchli ravishda ketma-ket qilib bo'lmaydi. Shu sababli, 
    uzun protein zanjirlarini kichik bo'laklarga ajratish kerak, keyinchalik ularni 
    alohida-alohida tartiblash mumkin. Ovqat hazm qilish ham tomonidan amalga 
    oshiriladi endopeptidazlar kabi tripsin yoki pepsin yoki 
    kabi 
    kimyoviy 
    reagentlar tomonidan amalga oshiriladi siyanogen bromid. Turli xil fermentlar 
    turli xil dekolte naqshlarini beradi va parchalar orasidagi ustma-ust umumiy 
    ketma-ketlikni yaratish uchun foydalanish mumkin. 
    Reaksiya 
    Tartibga 
    solinadigan 
    peptid 
    bu adsorbsiyalangan qattiq 
    yuzaga 
    Umumiy substrat bilan qoplangan shisha tola polibren, a katyonik polimer. 
    Edman 
    reaktivi, fenilizotiyosiyanat (PITC), 
    adsorbsiyalangan 
    peptidga 
    yumshoq asos bilan qo'shiladi buferli eritma 12% dan trimetilamin. Bu N-
    terminal aminokislotaning amin guruhi bilan reaksiyaga kirishadi. 
    Keyin 
    terminal 
    aminokislota 
    qo'shilishi 
    bilan 
    tanlab 
    ajratilishi 
    mumkin suvsiz kislota. 
    Keyin 
    lotin izomeriyalar almashtirishni 
    berish feniltiyohidantoin, uni yuvish va xromatografiya yordamida aniqlash va 
    tsiklni takrorlash mumkin. Har bir qadamning samaradorligi taxminan 98% ni 
    tashkil etadi, bu taxminan 50 ta aminokislotani ishonchli aniqlashga imkon 
    beradi. 
    1. ^ Mixail A. Alterman; Piter Xantsiker (2011 yil 2 -dekabr). Aminokislotalarni tahlil qilish: usullari va 
    bayonnomalari. Humana Press. ISBN 978-1-61779-444-5
    . 

    15 
     
    Bekman-Coulter Porton LF3000G oqsillarni sekvensiya qilish mashinasi 
    Protein sekvensori 
    A oqsil 
    sekvenatori 
    [3]
     avtomatlashtirilgan 
    tarzda 
    Edman 
    degradatsiyasini amalga oshiradigan mashinadir. Protein yoki peptid namunasi 
    oqsil sekvenatorining reaksiya idishida immobilizatsiya qilinadi va Edman 
    degradatsiyasi amalga oshiriladi. Har bir tsikl oqsil yoki peptidlardan bitta 
    aminokislotani chiqaradi va hosil qiladi N-terminus va chiqarilgan 
    aminokislota hosilasi keyinchalik HPLC tomonidan aniqlanadi. Tartiblash 
    jarayoni bir butun uchun takroriy ravishda amalga oshiriladi polipeptid butun 
    o'lchov ketma-ketligi o'rnatilguncha yoki oldindan belgilangan tsikllar soni 
    uchun. 

    Download 435.7 Kb.
    1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   13




    Download 435.7 Kb.
    Pdf ko'rish