|
Periferik kandan dna izolasyonu
|
| bet | 5/18 | | Sana | 24.03.2017 | | Hajmi | 1.99 Mb. | | #2134 |
denatürasyon 94ºC’de çift iplikçikli DNA’nın iki tek iplikçiğe ayrılması;
annealing (eşleşme) 50-60ºC’de primerlerin tek iplikçik halindeki kalıp DNA’ya spesifik olarak bağlanmaları;
extension (sentez) 72ºC’de, primerlerle sınırlandırılmış olan bölgenin Taq pol. tarafından amplifikasyonu.
Deneturasyon ve extension fazlarındaki ısılar değizmezken annealing (eşleşme) ısısı istenen DNA dizisinin AT/GC içeriğine göre değişir. Sikluslar yaklaşık 30 defa tekrar edilir. Yeni sentezlenen fragmentler bir sonraki siklusta kalıp görevi görürler böylelikle her siklusta çoğaltılmak istenen dizinin logaritmik (2n, n=30-35 döngü) bir artışı söz konusudur. PCR ile 150–3000 nükleotidlik diziler çoğaltılabilir.
primerler 1 mM
dNTP’s 2 mM
10 X Buffer (MBI) 1x
MgCl 1.50 mM
Taq(MBI) 1U
DNA 100 ng
|
| |
