|
O‘zbekiston respublikasi oliy va o‘rta maxsus ta’lim vazirligi universiteti fakulteti
|
| bet | 10/11 | | Sana | 02.06.2023 | | Hajmi | 0.66 Mb. | | #68899 |
Bog'liq PZR TEXNOLOGIYA ZZZ Azizjon — копия, mb mustaqil ish Oygul, Ўралов Жавлонбек Кўчқорбой ўғли, 8 sinf kimyo fanidan taqvim rejalar 2022 2023 o\'quv yili, OarjhKqYURTNotk6cmQH1RWDK8u8cdRPqOguYugF, ARIZA voyaga yetmagan несовершеннолетн рус узб, 1683958228, genetik kod.ish1, Mustaqil talim genomika sheraliyev, noallel genlar I 3, TERMODINAMIK JARAYONLARNI TAVSIFLARI BILAN TANISHISH, Davomat, Termiz MTU ustavi, 3342204072 (2)Asimmetrik PCR: U to'g'ridan-to'g'ri DNK ketma-ketligi uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan DNK ketma-ketligining bir qatorli nusxalarini yaratish uchun ishlatiladi. Ikkita primer (100: 1 nisbat) reaktsiya aralashmasida shunday tuzatilganki, ulardan bittasi taxminan 10 yoki undan ko'p tsiklni tugatadi. Ushbu tsikllardan so'ng DNK segmentining faqat bitta zanjiri nusxalanadi va bu nusxalar DNK ketma-ketligi uchun ideal boshlang'ich materialdir. Ushbu o'zgarish assimetrik PCR deb nomlanadi.
APR-PCR: O'zboshimchalik bilan astarlangan PCR (AP-PCR)-bu tasodifiy kuchaytirilgan polimorf DNK (RAPD) turidir, bu erda PCRda genomik DNKni ko'paytirish uchun 10 dan 50 tagacha bitta primer ishlatiladi. uels va Makklend (1990) o'zboshimchalik bilan astarlangan – PCRni ishlab chiqdi va genomlarni o'zboshimchalik bilan primerlar bilan barmoq bosib chiqarishni amalga oshirdi.
Polimeraza zanjiri reaktsiyasi molekulyar biologiya, tibbiyot va biotexnologiyaning turli sohalarida foydalidir.
PCR DNK parchalarini klonlash uchun hujayrasiz, tezkor va sezgir usuldir. Polimorfizm va mutatsiyalarni tahlil qilish uchun standart reaktsiya va PCRga asoslangan turli xil usullar ishlab chiqilgan. Standart PCR - bu in vitro protsedura bo'lib, hatto DNKning maqsadli ketma -ketligini, hatto juda oz miqdordagi materialdan yoki qadimgi materiallardan ham oshiradi. Selektiv kuchaytirish maqsadli DNKning yonma-yon joylashgan DNK ketma-ketligi haqida oldindan ma'lumot talab qiladi. Ushbu ma'lumotlarga asoslanib, uzunligi 15-25 tagacha bo'lgan juft oligonukleotidli primerlar ishlab chiqilgan. Primerlar maqsadli saytning 3′ uchidan tashqaridagi ketma-ketliklarni to'ldiradi va ular bilan maxsus bog'lanadi. PCR zanjirli reaktsiyadir, chunki yangi sintez qilingan DNK zanjirlari keyingi 25-35 tsikl uchun keyingi DNK sintezi uchun shablon sifatida ishlaydi. Nazariy jihatdan har bir tsikl kuchaytirilgan DNK miqdorini ikki baravar oshiradi. Oxirida, aniq maqsadli ketma -ketlikning kamida 10^5 nusxasi mavjud. Buni jel elektroforezidan keyin ma'lum bir o'lchamdagi alohida tarmoqli sifatida ko'rish mumkin. Avtomatlashtirilgan termal tsikllarda uchta aniq vaqt va harorat bilan boshqariladigan reaktsiyalarni o'z ichiga olgan har bir tsikl taxminan 1-5 daqiqa davom etadi. Har bir tsiklning uchta bosqichi-(1) inson DNKi uchun taxminan 93-95 ° C gacha bo'lgan ikki ipli DNKning denatürasyonu, (2) dupleks DNKning kutilgan erish haroratiga qarab, taxminan 50-70 ° C da tavlanish. , va (3) DNK sintezi issiqlikka bardoshli DNK polimeraza yordamida (issiq buloqlarda yashovchi mikroorganizmlardan, masalan, Thermophilus aquaticus, Taq polimerazadan), odatda taxminan 70-75 ° C da. Har bir keyingi tsiklda shablon (ko'k rangda ko'rsatilgan) va oldingi tsikl davomida yangi sintez qilingan DNK (qizil rangda ko'rsatilgan) sintezning boshqa bosqichi uchun shablon sifatida ishlaydi. Birinchi tsikl 3 va 8242 -sonlarda turli uzunlikdagi (o'q bilan ko'rsatilgan) yangi sintezlangan DNKni keltirib chiqaradi, chunki sintez maqsadli ketma -ketlikdan tashqarida davom etadi. Xuddi shu narsa keyingi sikllarda ham sodir bo'ladi, lekin o'zgaruvchan zanjirlar har ikki uchida ham sobit uzunlikdagi yangi DNK bilan tez ko'payadi, chunki sintez DNKning qarama-qarshi shablonidagi primerning uchidan o'tib keta olmaydi.
Polipeptidning qisman ma'lum bo'lgan aminokislotalar ketma-ketligi PCR uchun zarur bo'lgan ketma-ketlik ma'lumotlarini olish uchun ishlatilishi mumkin. Uning mRNKsidan cDNKni olish mumkin va tegishli oligonukleotid primerlarini tayyorlash uchun sezgi va sezuvchanlik chizig'ining ketma -ketligini aniqlash mumkin (1). Turli xil RNKlar oz miqdorda mavjud bo'lganda, genning turli ekzonlaridan cDNKni kuchaytirish uchun tezkor PCRga asoslangan usullar qo'llaniladi. cDNK mRNK dan teskari transkriptaza orqali olinadi, keyinchalik u ishqoriy gidroliz bilan chiqariladi (2). To'ldiruvchi yangi DNK zanjiri sintez qilingandan so'ng, DNK PCR (3) yordamida kuchaytirilishi mumkin. Teskari transkriptaza PCR (RT-PCR) ma'lum ekzon ketma-ketliklari gen ichida keng tarqalgan bo'lsa ishlatilishi mumkin. cDNK uchlarini tez kuchaytirish bilan (RACE-PCR), 5? va 3? oxirgi ketma-ketliklar cDNK dan ajratilishi mumkin.
MSP ko'p jihatdan primerning bisulfit konvertatsiya qilingan ketma-ketligiga bog'liq ekan, tajriba muvaffaqiyatida astar dizayni hal qiluvchi rol o'ynaydi. Birinchidan, primerni bog'laydigan joylar metilatsiyaga sezgir qoldiqlarni o'z ichiga olishi kerak, shuning uchun metillangan va metillanmagan ketma-ketlikni aniqlash mumkin. Ikkinchidan, metillanmagan primerlar odatda AT ga boy va shuning uchun T bilan uzun (masalan, >30 nt) bo'lishi kerak.m Maxsus tavlanishni ta'minlash uchun ≥60 ° C. Bundan tashqari, yuqori AT ketma-ketliklari ko'pincha primer-dimer hosil bo'lishini, mos kelmaslik gibridizatsiyasini, DNK polimerazasining sirpanishini va kuchaytirilishini qo'llab-quvvatlaydi. Shuning uchun tanlangan DNK polimeraza AT/GC tarkibining keng diapazoniga ega shablonlarni kuchaytira olishi kerak. Uchinchidan, noto'g'ri ijobiy natijalarni baholash uchun primerning o'ziga xosligi ma'lum va noma'lum metilatsiya holatlarining nazorat DNKlari bilan empirik tarzda tekshirilishi kerak. Metillanish holatini tayanch-juft nomuvofiqligi bilan ajratishga yordam berish uchun metillanish va metillanish bo'lmagan primerlarni ularning 3' uchida bir juft G-A yoki T-C bilan loyihalash tavsiya etiladi (7 -rasm).
AT ga boy ketma-ketlikni kuchaytirishdan tashqari, DNK polimeraza bisulfit bilan davolashdan so'ng DNKdagi U qoldiqlarini o'qiy olishi kerak. Yuqori aniqlikdagi DNK polimerazalarining ko'pchiligi arxaik kelib chiqishi uratsil bilan bog'langan cho'ntagining mavjudligi sababli MSP uchun mos kelmaydi (agar maxsus o'zgartirilmagan bo'lsa). Xuddi shunday, shablonlar ketma-ketligida U ning mavjudligi PCR kontaminatsiyasining oldini olish uchun UDG bilan davolashga imkon bermaydi.
Yakuniy PCR o'rniga, real vaqtda PCR metilatsiyani ko'proq miqdoriy tahlil qilish uchun MSP bilan ishlatilishi mumkin. Haqiqiy vaqtda PCR yordamida erigan egri chiziqli PCR amplikonlarini tahlil qilish qiziqish joyining metillanish holatini aniqlash uchun PCRga asoslangan muqobil usuldir.
PCR fan, sanoat, tibbiyot, qishloq xo'jaligi va tabiatni muhofaza qilishda keng qo'llanilishi uchun ishlatiladi. Sog'liqni saqlash va tibbiyotda u saraton va inson genetik kasalliklari, masalan, kist fibrozi va Parkinson kasalligi haqida tushunchamizni rivojlantirish uchun ishlatiladi. PCR zamburug'li, bakterial va virusli kasalliklarni genetik aniqlashda ham muhimdir. U, masalan, siydik namunalarida gonoreya va xlamidiyani aniqlash uchun ishlatiladi. PCR shuningdek, onalik, otalik va boshqa qon munosabatlarini aniqlashga yordam beradi va sud-tibbiyot ekspertlari tomonidan shaxslarni genetik profiliga qarab aniqlash uchun ishlatiladi. Bu usul, shuningdek, olimlarga turli xil turlar yoki populyatsiyalar bo'ylab tarqalgan o'xshash genlarni ovlash uchun tegishli turlarning evolyutsion masofasini aniqlash va yo'qolib ketgan hayvonlar namunalaridan ajratilgan qadimgi DNKni ko'paytirish imkonini beradi. PCR, shuningdek, asirlikdagi hayvonlarning nasl-nasabini oldini olishga va noqonuniy ravishda olingan fil suyagining kelib chiqishini aniqlashga yordam beradigan tabiatni muhofaza qilish ishlari uchun juda muhimdir. Texnika qishloq xo'jaligida o'simlik turlarini, zararkunandalari va kasalliklarini aniqlash uchun ham qo'llaniladi.
XULOSA
PCR bilan bog'liq cheklovlardan biri shundaki, u foydalanuvchi bilan almashish qiyin bo'lgan uskunalar va infratuzilmani talab qiladi. Ushbu muammolarning ba'zilari LAMP texnikasi yordamida engib o'tilmoqda, uni dalada bajarish osonroq, chunki u kamroq murakkab va arzonroq asboblarni talab qiladi. Uning afzalligi shundaki, u qisman qayta ishlangan va/yoki qayta ishlanmagan namunalardan DNKni kuchaytira oladi va juda tezdir.
LAMP hozirda keng qo'llaniladigan molekulyar diagnostika usuli bo'lib, davolash punkti diagnostik inqilobining boshida turadi. LAMP o'zining soddaligi, arzonligi, kam energiya sarfi, o'rganish qulayligi va mustahkamligi tufayli past va o'rta daromadli mamlakatlarda yuqumli kasalliklarni skrining qilish uchun foydali diagnostika va aniqlash usulini isbotlamoqda. 2005 yildan beri bezgak, sil va uyqu kasalliklari uchun skrining dasturlarida qo'llanila boshlandi. Usul yaqinda Ebola virusini aniqlashda ham qo'llanilgan. Hozirda LAMP meningitni tez aniqlash uchun vosita bera oladimi yoki yo'qligini tekshirish bo'yicha tekshiruvlar davom etmoqda, bu esa infektsiyani tanani bosib olishidan oldin kasallikni aniqlashda qiyinchilik tug'dirmoqda.
Ushbu tadqiqotda bir nechta cheklovli saytlarga ega bo'lgan ikki qatorli adapter ishlab chiqilgan. Ushbu strategiya maqsadni aniqlash uchun qulay PCR tomonidan tekshirilgan. Ushbu usul yordamida genomning yurishini amalga oshirish maxsus primerlar va oddiy adapterni loyihalash orqali o'rganish vaqti va narxini qisqartirdi. Bir nechta mumkin bo'lgan mahsulotlar orasidagi maqsadli ketma -ketlikni tasdiqlash uchun, maxsus primerlarni klonlash yoki qayta loyihalash o'rniga bitta PCR (uchinchi PCR) bajarildi. Uzunroq DNK olish uchun boshqa cheklovli fermentlar yoki yuqori aniqlikdagi DNK polimerazasidan foydalanish mumkin. Umuman olganda, har qanday genning noma'lum hududini aniqlash uchun adapterga asoslangan sintetik adapter ketma -ketligi va oldinga siljishdan foydalanish mumkin. Usul foydalanuvchilari faqat maqsad genining ma'lum ketma -ketligidan foydalanib, teskari primerni loyihalashlari kerak. Bundan tashqari, ushbu usulni qo'llash tadqiqotchilarga hozirgi adaptorlarning bir nechta cheklash joylari o'rniga o'zlarining kerakli cheklash fermenti joylarini almashtirishga yordam beradi.
|
| |
