|
YUPQA QAVATLI XROMATOGRAFIYA
|
| bet | 5/10 | | Sana | 16.05.2023 | | Hajmi | 3.38 Mb. | | #60468 |
Bog'liq adsobtsion xromatagirafiya111111111111 Sekvenirlash usullari, Biotexnologiya laboratoriya, 5-mavzu ep, NAMUNA PEDAGOGIKA sulaymonov d, 2-laboratoriya Fitopatogen virusli kasalliklarni belgilar, Boshlang‘ich sinflarda matematika o‘qitish metodikasi fan, 1. o\'quv dasturi, 1.o\'quv dasturi, Mikroorganizmlar gen muxandisligi, KARUPSIYAGA QARSHI KURASH, Anabaena cylindrica, Илова 1 Lotincha (1), sohibjon kondukto, 01000001.5 YUPQA QAVATLI XROMATOGRAFIYA
Xromatografik usullarni muhim afzalligi tеzkorligida ya’ni eksprеss usul hisoblanadi. Kimyoviy tahlilda ko`proq yuzaviy xromatografiyani qog`ozda yoki sorbеntning yupqa qatlamida bajariladigan turlari ishlatiladi.
Ta’rif: Yupqa qavat xromatografiyasi - aralashmadagi moddalarni harakatchan elyuеnt (erituvchilar aralashmasi) va plastinkaga bir tеkis yopishtirilgan sorbеntning yupqa qavatida turlicha taqsimlanish sababli o`zaro ajralishiga asoslangan.
Xromatografiyani sorbеntning yupqa qavatida bajarish uchun shisha yoki folga plastinka sirtiga sorbеntni gipslik aralashmasi maxsus moslama yordamida bir tеkis yoyiladi, quritiladi. Plastinkani ostki chеtidan 1,5 sm masofada, yumshoq qalam bilan, start chizig`i chiziladi. Ingichka kapilyar vositasida, start chizig’i 1,0 - 1,5 sm oralig’ida tеkshiriluvchi eritma va aniqlanuvchi moddaning standart eritmasidan kichik tomchi tushiriladi. Plastinka tubida 1 sm qalinlikda elyuеntsuyuqlik bo`lgan stakan (kolonkaga) tik holda joylanib, stakan og’zi yopiladi.
Elyuеnt sorbеntni namlab yuqoriga harakatlanish jarayonida start chizig`iga tushirilgan moddalarni o`zida eritib yuqoriga ko`tarila boradi.
Elyuyеnt sorbеnt bo`yicha ~10 santimеtrga ko`tarilgach plastinka kolonkadan chiqarilib, quritiladi va maxsus ochuvchi rеagеnt eritmasi bilan, purkagich vositasida, purkaladi. Ellips shaklida hosil bo`lgan rangli dog`ni plastinkadagi start chizigiga nisbatan holatini bеlgilovchi Rf qiymatiga ko`ra sifat tahlil bajariladi.
Masalan. O’rta, mеta va para aminobеnzoy kislotalar sifat tahlilini bajarish uchun ularni standart eritmalari tomizilgan plastinka 1:8 nisbatdagi sirka kislota va xloroform aralashmasi quyilgan kolonkada (elyuirlanadi) elyuyеnt shimdirilgach, quritib rang hosil qiluvchi rеagеntlar HNO2 va -naftol eritmalari bilan purkaladi, to`q sariq dog’ hosil bo`ladi.
Yupqa qatlamli xromatografiya keyingi vaqtlarda organik moddalar, ayniqsa, tabiiy birikmalarni analiz qilish va ajratishda keng qo’llanilmoqda. Yupqa qavatli xromatografiya (YuQX) sezgirligi yuqoriligi, analizning tez bajarilishi, xromatogrammalarni uzoq saqlash mumkinligi va ulardan moddalarni ancha oson desorbilab olish imkoniyatlari bilan boshqa xromatografik usullardan farq qiladi.
Bu usul yordamida kimyoviy reaksiyalarning borishini nazorat qilish, xromatografik kolonka yordamida ajratilayotgan murakkab aralashmalarning ayrim tarkibiy qismlarga ajralishini kuzatish, moddalarni tez identifikatsiyalash va juda kam miqdordagi organik moddalarni aralashmadan miqdoriy to’liq ajratib olish va tozalash mumkin. Bularni bajarish uchun atigi 10-30 daqiqa vaqt sarf bo’ladi.
YuQX mahsus shisha plastinkaga yopishmagan yoki yopishgan sorbentning yupqa qatlamlarida bajariladi. Buning uchun adsorbent uzunligi 15-20 sm, eni 4-20 sm bo’lgan plastinkaga maxsus yupqa qatlam hosil qiluvchi asbob yordamida yotqiziladi. Plastinkaning bir chetidan 1,5-2 sm masofada ma’lum oraliqdagi bir chiziqda yotuvchi nuqtalar belgilanadi. Bu nuqtalar joylashgan chiziq start chizig’I deyiladi. Start chizig’iga bir xil miqdordagi tekshirilayotgan modda eritmasi maxsus shisha kapillyar yoki pipetka yordamida bir necha tomchidan tomiziladi.
Plastinka erituvchilar sistemasi solingan xromatografiyalash kamerasiga, modda tomizilgan nuqtalari bo’lgan tomoni erituvchiga tushirilgan, lekin nuqtalar erituvchiga tegmagan holda joylashtiriladi. Xromatografiyalash kamerasining usti zich qilib yopiladi. Plastinka kameraga qiya holda o’rnatiladi (2-rasm).
Adsorbentli shisha plastinka eksikator
2-rasm. Yupqa qatlamli xromatografiya uchun asbob.
Kamera sifatida keng stakan, eksikator va boshqalardan foydalanish mumkin. Erituvchi yuqoriga ko’tarilib, plastinkaning qarama-qarshi uchiga 0,5-1sm qolganda xromatografiyalash to’xtatiladi. Buning uchun plastinka kameradan olinadi va quritiladi.
Qog’oz xromatografiyasi ham yupqa qavatli xromatografiyaning bir ko’rinishi bo’lib, u murakkab aralashmalarni, ayniqsa, oksillar, uglevodlar, yog’lar, antibiotiklar, gormonlar, glikozidlar, alkaloidlar, fenollar va boshqa tabiiy moddalarni ajratish va aniqlashda ishlatiladi.
Bu usulda qog’ozga adsorbilangan suv turg’un faza, harakatchan faza sifatida esa suv bilan aralashmaydigan erituvchi ishlatiladi. Tekshiriladigan aralashmadagi moddalarni ajratish shu ikki erituvchi orasida ularning taqsimlanish koeffitsiyentiga bog’liq. Qog’oz adsorbent hisoblanadi. Qog’oz xromatografiyasi erituvchining yo’nalishiga qarab, yuqoriga ko’tariluvchi (3-rasm, a), pastga tushuvchi (3-rasm, b) va radial xromatografiya usullariga (4-rasm) bo’linadi.
3-rasm.Yuqoriga ko’tariluvchi (a) va pastga tushuvchi (b) qog’oz xromatografiyasi usullari uchun qurilmalar.
Agar aralashmadagi moddalar har xil erituvchilarda turlicha R qiymatlariga ega bo’lsalar, ularni ikki tomonlama xromatografiya yordamida ajratish mumkin. Buning uchun kvadrat bichimli qog’oz olinib, modda qog’ozning burchagiga tomiziladi va oldin bir xil erituvchilar sistemasida xromatografiya o’tkaziladi, so’ngra qog’oz quritiladi va u 90°C ga burilgandan so’ng ikkinchi erituvchi sistemasida xromatografiya o’tkaziladi.
Bir xil qiymatli Rf olish uchun xromatografiyalash sharoiti (eritmalar sistemasi tarkibi, harorat, qog’ozning sifati, jarayonning borish vaqti, kameraning germetiklik darajasi va boshqalar) bir xil bo’lishi kerak. Tekshirilayotgan moddalar aralashmasining eritmasi shisha kapillyar yoki pipetka yordamida yuqoriga siljuvchi va pastga tushuvchi xromatografiyalarda qog’oz chetidan 2-3 sm masofaga, gorizontal radial xromatografiyada esa qog’oz markazidagi qog’oz pilikdan 1,5-2 sm masofada ma’lum oraliqda bir necha tomchidan tomiziladi. Qog’oz namuna bilan
4-rasm. Radial qog’oz xromatografiyasi
quritiladi va maxsus kameralardagi erituvchi sistemasiga modda tomizilgan tomchilar tegmaydigan qilib joylashtiriladi. Yuqoriga siljuvchi va pastga tushuvchi xromatografiyalarda kamera devorlariga uni to’yintirish uchun erituvchi sistemasi shimdirilgan qog’oz tikka qilib qo’yiladi.
5-rasm. Xromatogramma
Yuqoriga siljuvchi xromatografiyada erituvchining yuqoriga ko’tarilishi qiyinroq bo’lganligi sababli Rf qiymati kichik moddalarni ajratish qiyin bo’ladi. Pastga tushuvchi xromatografiyada kameraning yuqori qismiga o’rnatilgan idishdagi erituvchi qog’oz bo’ylab yuqoridan pastga siljiydi, bu ancha tez amalga oshadi. Bunda eng asosiysi erituvchi qog’ozdan pastga oqib tushishi hisobiga kichik Rf qiymatli moddalarni ham ajratish mumkin. Xromatogramma ionogen va kompleks hosil qiluvchi maxsus reagentlar bilan ishlanganda (pulverizator yordamida purkalganda), rangli dog’lar hosil bo’ladi. Moddalarni topish uchun bu dog’larning Rf qiymatlari «guvohlar»ning Rf qiymatlari bilan solishtiriladi. Guvohlar yordamida moddalarni topishda aralashmada bo’lishi taxmin qilinayotgan moddaning aniq namunasi eritilib, tekshirilayotgan eritma bilan yonma-yon yoki aralashtirib quyiladi. Rf kiymatni topish uchun modda qo’yilgan start chiziqdan (5-rasm) modda (dog’) markazigacha bo’lgan (AB) masofa start chizig’idan erituvchi yetib borgan front chizig’igacha bo’lgan masofaga (AB) bo’linadi.
Yupqa qatlam хrоmatоgrafiyasi (YuQХ, тонкослойная хроматографияТСХ, thin layer chromatography-TLC) оrganik birikmalar aralashmalarini ajratishning tezkоr usullaridan biri. Shisha yoki alyuminiy plastinkaga yotkizilgan sоrbentning yupqa qatlamiga ajratiladigan aralashma eritmasidan bir necha nuqtalar ko’rinishida tоmiziladi. Хrоmatоgrafik kamerada harakatchan faza (elyuent) plastinka bo’ylab pastdan yuqоriga ko’tarilganda aralashma tarkibidagi mоddalar bir-biridan ajraladi. Rangsiz mоddalar plastinkani turli kimyoviy reagentlar bilan ishlоv berish (purkash va оchiltirish) оrqali ranglar hоsil qilish yo’li bilan aniqlanadi.
Lyuminestsent indikatоrli tayyor “Silufоl” plastinkalari ishlatilganida mоddalarning dоg’larini UB-nur оrqali ko’rish mumkin.
Хrоmatоgrammadagi mоdda dоg’lari Rf qiymati bilan harakterlanadi. U mоddaning harakat qilgan masоfasini erituvchi harakati masоfasiga bo’lish оrqali hisоblab tоpiladi.
|
| |
