|
Xuzuridagi ilmiy daraja beruvchi ilmiy kengashi namangan davlat unversiteti mahkamov mirzohid muzaffarovich
|
| bet | 6/10 | | Sana | 28.05.2024 | | Hajmi | 0,66 Mb. | | #255961 |
Bog'liq 2 5363800663870425413ASOSIY QISMI
II-BOB TADQIQOT OLIBBORILGAN MATERYALLARI VAUSLLAR
2.1. Тадқиқот материаллари, ўтказилиш шароитлари
ЎзР ФA Биооргaник кимё институти томонидaн тaқдим
2.2. Тадқиқотларни олиб бориш тартиби
Тaжрибaлaр зотсиз вaзни 180-200 г бўлгaн оқ эркaк кaлaмушлaрдa олиб борилди. Тaжрибaлaр дaвомидa қўллaнилгaн ҳaйвонлaр яхши ҳaво aлмaшaдиган вивaрий шaроитидa, 50х25х40 см ўлчaмдaги полиэтилен кaтaклaрдa 6-8 тaдaн сaқлaнди. Вивaрий хонa хaрорaти 22-24°С ни ҳaво нaмлиги 60-70% ни тaшкил этди. Ҳaйвонлaрнинг озуқa вa сувгa бўлгaн эҳтиёжининг эркинлиги тaъминлaнди. Озуқa сифaтидa ҳaйвонлaргa нон, буғдой, мaккaжўхори, кaмбикорм, пистa, иккинчи нaв колбaсa вa сут мaҳсулотлaри берилди. Полифенолларни эритишда ишлатилган диметилсульфоксид 44
2.3. Митохондрияларни ажратиш усули
Каламуш жигари митохондриялари дифференциал центрифугалаш W.C.Schneider усули ёрдамида ажратиб олинди. Ажратиш муҳити таркиби: 250 мМ сахароза, 10 мМ трис-хлорид, 1 мМ ЭДТА, рН 7,4. Каламуш декапитация қилингандан кейин, жигари ажратиш муҳитига солинди ва тарозида унинг массаси тортилди. Тўқимани майдалаш учун тешиклари катталиги 1 мм бўлган микропрессдан ўтказилди. Майдаланган жигар тўқимаси махсус гомогенезаторга солиниб устига 1:6 нисбатда ажратиш муҳити қўшилди ва тефлонли пестик ёрдамида гомогенезация қилинди. Гомогенезациялаш электромоторга ўрнатилган пестик ёрдамида минутига 600-800 айланма тезликда амалга оширилди. Ҳосил бўлган гомогенат центрифуга пробиркасига қуйилди. Гомогенатдан митохондрияни ажратиш учун ЦЛР-1 центрифугадан фойдаланилди. Центрифугадаги муҳит 0-2°С ни ташкил қилди ва центрифугалаш жараёни 2 босқичда амалга оширилди. Биринчи босқичда, центрифугалашда минутига 1500 айланиш тезлигида (нисбий марказдан қочувчи тезланиш 600 g) 7-8 минут давом этди. Бу вақтда ҳужайранинг оғир агрегатлари чўкади. Чўкма супернатанти бошқа тоза ҳолдаги пробиркага олинди ва центрифуга роторига жойлаштирилди. Иккинчи босқичда центрифугалаш минутига 6000 айланиш тезлигида (нисбий марказдан қочувчи тезланиш 6000g) 15 минутда амалга оширилди. Сўнгра пробирка ротордан олинди ва қуйи қисмига чўккан митохондриялар суюқ қисмидан ажратилди. Пробирка деворларидан суюқлик қолдиқлари ва ёғ бўлаклари фильтрли қоғоз ёрдамида тозаланди. Ажратиш муҳитидан тозаланган митохондрияларни автопипетка ёрдамида махсус идишга олинди. Тажрибалар ўтказиш учун митохондриялар 1:5 нисбат ҳажмда ЭДТАсиз ажратиш
|
| |
