|
Biokimyodan laboratoriya mashg’ulotlari 1-mashg’ulot laboratoriya mashg’ulot darsiga kirish va laboratoriya texnikasi bilan tanishtirish
|
| bet | 31/32 | | Sana | 13.12.2023 | | Hajmi | 397,5 Kb. | | #117673 |
Bog'liq Biokimyodan laboratoriya mashg printga (2) Керакли асбоб-ускуналар: ФЭК, сув хаммоми, пробирка ва пипеткалар, наконечниклар, термостат.
Керакли реактивлар: сахароза, натрий ацетат тузи, сирка кислота, глюкооксидаза ферменти, калий ферроцианид, икки асосли калий гидрофосфат, дистилланган сув.
Ишчи реактив: 68 мл 1М ацетат буферида 20 мг глюкооксидаза ферменти эритилади. Хосил бўлган эритма ўлчовли колбага ўтказилади ва эритма 100 мл га етказилади. Бунда калий ферроцианиднинг (190 мг) эритмадаги улуши 0.6% ни ташкил қилиши лозим.
Ишни бажарилиш тартиби:
Текширилиши лозим бўлган объект (супернатант, культура суюқлиги ва бошқалар) фильтрланади.
Глюкоза миқдори турлича бўлиши учун суюлтириш ишлари олиб борилади. Суюлтирилган намуналардан янги пробиркаларга 0.5 мл дан оламиз ва барчасига 0.1М ацетат буферидан 1 мл дан қўшиб чиқилади.
Барча пробиркаларни ва унга паралелл равишда 0.5М сахароза эритмасини 500С хароратда 10 минут давомида инкубация қиламиз. Инкубация тугагач пробиркаларга 0.5 мл дан сахароза эритмасидан соламиз.Сахарозали пробиркаларни 500С хароратда 5 минут инкубациялаймиз.
Инкубацияни тугатгач реакцияни тўхтатиш учун икки асосли 0.2 М калий гидрофосфат (K2HPO4) эритмасидан 3 мл дан қўшиб чиқамиз. Реакция тўхтатилгандан сўнг 5 минут давомида қайнатамиз.
Олдиндан 10 мг глюкооксидазани 34 мл 1М ацетат буферда эритиб қўйилади ва фильтрланади. 95 мг калий ферроцианидни (К4Fe(CN)6) 15 мл 1М ли ацетат буферида эритилади. Глюкооксидаза ва калий ферроцианид эритмалари қўшилади ва умумий хажм 68 мл га етказилади. Эритмани етказишда 1М ацетат буферидан фойдаланамиз.
Реакция тўхтатилган пробиркалардан янги пробиркаларга 0.2 мл (200 мкл) дан оламиз ва уларга 5-босқичда тайёрланган эритмадан 3 мл дан қуйилади. Гюкооксидаза ва ферроцианид эритмаси қуйилгач 30 минут давомида инкубацияланади. Инкубация тугагач эритмани оптик зичлиги D415 да текширилади ва олинган натижалар расмийлаштирилади.
-
№
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
Глюкоза концентрацияси (мкг/мл)
|
100
|
200
|
300
|
400
|
500
|
600
|
К
|
cуюлтириш
|
Глюкозали эритма (мл)
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
-
|
Сув (мл)
|
9
|
8
|
7
|
6
|
5
|
4
|
2
|
D415
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Bosh sahifa
Aloqalar
Bosh sahifa
Biokimyodan laboratoriya mashg’ulotlari 1-mashg’ulot laboratoriya mashg’ulot darsiga kirish va laboratoriya texnikasi bilan tanishtirish
|
